内参抗体种类很多,比如β-Actin、β-Tubulin、GAPDH等,下面简单介绍下如何选择内参。 一、目的蛋白分子量 选择内参抗体时,应该考虑目的蛋白分子量的大小。通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5KDa以上。比如检测目的蛋白分子量为45KDa,此时不适宜选择β-actin(42KDa)作为内参,可以考虑选择GAPDH(36KDa)作为内参。
western 内参用的GAPDH分子量为146KD，检测条带大约在36kD，B-actin分子量为42KD。严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，这对实验结果分析是非常有用。要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。特别表达量不高...
2.目的蛋白分子量:选择内参时,应该考虑目的蛋白分子量的大小,通常应该保证目的蛋白与内参蛋白分子量相差5kDa以上,但勿差距太大。比如目的蛋白分子量为45kDa,此时不适宜选择β-actin 作为内参,可以考虑选择GAPDH或者β-tubulin作为内参。 3.目的蛋白表达部位:针对一般蛋白质检测,GAPDH、β-actin 或β-tubulin可以满足要...
β-actin作为内参是得到了公认的,这是针对大多数组织和细胞来说的,它广泛分布于细胞浆内,表达量非常丰富,其含量占所有细胞总蛋白的50%。但是在一些少量特殊的情况下,如脂肪组织或细胞内,β-Actin的表达量就很少。β-actin由375个氨基酸组成,分子量大小为42KD左右。 2.Tubulin Tubulin即微管蛋白,是细胞的一种骨架...