ITR是多用途元件，作为病毒基因组封装的包装信号，以及病毒基因组复制的起始位点。以上9个辅助和结构蛋白基因的表达受三个不同的启动子p5、p19和p40的调控。p5驱动辅助蛋白Rep78和Rep68的表达，而p19则是控制Rep52和Rep40，p40调节VP1、VP2、VP3、MAAP和组装AAP的表达，AAP是最近发现的一种蛋白，在大多数血清型...
根据目前的文献,可以假设AAV与细胞表面的特异性初级受体和共受体相互作用,从而触发其内吞作用进入内体。结构改变暴露了VP1和VP2的N末端,使AAV病毒粒子从内体中释放出来并积聚在细胞的核周区域。一旦进入细胞核,AAV基因组就会被释放出来,它们的单链DNA被转化为双链DNA(dsDNA)进行转录和翻译。不同血清型衣壳氨基酸序列...
ITR能够诱导转基因表达,在载体生产和确保在细胞中持久转导发挥重要作用。 腺相关病毒(AAV)载体介导的基因治疗药物被批准用于遗传性失明和脊髓性肌萎缩的治疗;对其他罕见疾病,包括血友病和杜氏肌营养不良,也取得了很好的治疗效果。 近几十年来,病毒载体介导的基因疗法已被用于临床试验,以治疗心血管、肌肉、代谢、神经系...
基因组两端含有反向末端重复序列(ITR),该结构不仅在病毒基因组复制过程中发挥关键作用,还作为包装信号确保病毒粒子的正确组装。AAV的rep基因负责编码四种与病毒复制相关的蛋白质,分别为Rep78、Rep68、Rep52和Rep40,这些蛋白在AAV生命周期的不同阶段起关键作用。cap基因通过不同的转录起始位点和剪接方式编码VP1、VP2和VP...
值得注意的是,ITR序列也可以作为重组元件,促进载体基因组的重组。rAAV转导途径涉及多个细胞事件,可能在任何步骤失败或被宿主破坏,从而削弱或阻止转导。因此,完全理解这一途径将有助于识别影响rAAV转导效率的其他关键宿主因子。 图5 AAV载体入侵细胞和细胞内运输的模型。在与受体和辅助受体的相互作用下,以及在必需的...
ITR序列在AAV的转导过程中起到了两个主要的作用。首先,它们能够与细胞核中的受体结合,促进AAV进入目标细胞。这种受体介导的内吞作用使AAV能够绕过细胞膜的屏障,进入到细胞的胞质中。其次,在AAV的复制过程中,ITR序列也发挥着重要的作用。在AAV进入细胞核后,ITR序列能够通过与细胞核中的特定蛋白质结合,形成复制起始...
AAV 反向末端重复序列的作用主要体现在以下几个方面: 首先,ITR 起到了组织 AAV 基因组的作用。通过两个末端重复序列的反向排列,AAV 基因组被紧密地连接在一起,增加了基因组的稳定性。 其次,ITR 是 AAV 复制和表达的关键结构。在 AAV 感染宿主细胞后,ITR 区域能够与宿主细胞的复制机制相互作用,从而启动 AAV 的...
ITR在AAV复制和包装过程中起关键作用，并具有一定的顺式激活序列功能。病毒生命周期涉及Rep和Cap蛋白，前者负责复制和包装，后者与细胞表面受体结合，构成病毒的衣壳。Cap由p40启动子转录产生，包含VP1、VP2和VP3三种蛋白，比例为1:1:10。AAV通过Cap蛋白与细胞表面受体结合，随后进行内吞作用进入细胞。在...
在这种假设下,建立了许多有效生产含有报告基因或治疗基因的重组AAV(rAAV)载体的方法。 但是,也有报道称,ITR不是顺式有效复制和衣壳化所需的唯一元素。 一些研究小组已经在Rep基因的编码序列内鉴定出一个称为顺式作用Rep依赖元件(CARE)的序列。当在顺式中存在时,CARE显示出增加复制率和DNA包装信号的作用。