ITRs(反向末端重复序列)是生产rAAV载体所需的唯一顺式作用元件,它们位于AAV基因组的两侧,是AAV基因组自我复制的起点以及触发病毒包装的信号,在病毒的复制和包装过程中起关键作用。ITR区域的完整性对重组腺相关病毒(rAAV)的生产以及活性至关重要,缺失、突变的ITR可能导致AAV病毒产量及活性降低。本文从ITR序列结构,其在...
前言·作为基因治疗的明星载体,腺相关病毒基因组(AAV)备受关注,但它的反向末端重复序列(ITR)能形成高度稳定的二级结构,利用现有技术很难进行序列验证。为了突破这重障碍,GENEWIZ创研自主知识产权技术,运用原创的测序方法,清晰地分析这些复杂序列,助力研发人员有效地评估ITR区域的完整性。另外,针对ITR易缺失的特性,GENEWIZ...
ITR序列由于其GC含量高和回文结构复杂导致rAAV质粒在大肠杆菌复制时非常容易出现部分ITR序列缺失。ITR序列不完整会导致重组AAV病毒包装效率降低,并增加下游实验的变异性。影响ITR稳定性的机制非常复杂,目前还没有可以适合所有ITR质粒的商业化大肠杆菌菌株。金斯瑞蓬勃生物自主开发的PowerSTM-ITRrs菌株能够抑制ITR质粒DNA分子...
而rAAV是在非致病的wt-AAV基础上改造而成的基因载体。rAAV的基因组删除了全部的AAV蛋白编码序列,只保留了wt-AAV的ITR,以保证rAAV的包装能力的最大化,且有助于它们在体内递送时的低免疫原性和细胞毒性。 图2. AAV的结构和基因组(图片来源:genecarer.com) 图3. AAV的...
AAV的基因组是一条单链线性DNA，约4700bp，包括上下游两个开放阅读框（ORF）：Rep和Cap，位于分别由145个核苷酸组成的2个T形反向末端重复序列（ITR）之间。ITR的作用是充当病毒复制起点和包装信号，Rep基因参与病毒复制和整合，编码病毒复制蛋白，Cap基因负责编码病毒三个衣壳蛋白。自然界中存在的天然野生型腺相关病毒...
ITRs是AAV基因组侧端的短DNA序列,允许其在宿主细胞中形成多联体。它们与Rep蛋白一起促进基因与人类基因组在第19号染色体上AAVS1位点的整合,这种情况只能在野生型AAV中观察到 - 而不是载体形式。几乎所有载体都含有2型ITR。2型ITR可以与各种衣壳类型一起包装。用于包装rAAV载体的衣壳类型,即血清型-由第二个数字...
AAV系列抗体汇总——AAV病毒生产检测及优化的高品质工具 腺相关病毒（Adeno-associated virus，AAV）是一种小型的细小病毒，通常为二十面体结构，不含包膜。野生型AAV基因组为线性单链DNA，大小约4.7kb，两端分别具有T形反向末端重复序列（ITR），用作病毒复制的起点和包装信号。AAV中的Rep基因编码四种蛋白质（Rep...
AAV载体ITR区域的验证 AAV基因组结构中的反向末端重复序列(ITR)对于克隆来说是非常麻烦的,这些结构通常有145个碱基,位于目的基因两侧,在单链AAV基因组中会形成巨大的发夹状结构(图1)。由于ITRs中GC含量高,且具有回文性质,AAV质粒容易发生自发突变。当质粒在细菌...
AAV载体构建 AAV载体构建 制备AAV载体的常见策略是将目标基因序列插入到AAV基因组编码区域，同时保留两端的ITR序列。通过这样的构建，目标基因的表达将受到AAV生物学机制的精细调控，从而实现在目标细胞中的稳定表达。表达CAP和REP蛋白 为了支持AAV载体的复制和包装，研究人员需要同时提供CAP和REP蛋白。CAP蛋白作为外壳...
1. AAV的基因组结构 AAV病毒颗粒无包膜，由直径约20~26 nm的二十面体蛋白质衣壳和4.7 kb左右的单链DNA基因组组成。AAV基因组含有三个启动子（P5、P19、P40），由两端为145 nt的末端反向重复序列ITR和中间的Rep、Cap基因组成。其中，ITRs启动病毒自我复制，提供包装信号，参与病毒基因组在宿主基因组上的整合和...