为了利用AAV研究DGTM四因子（DNP63A、GRHL2、TFAP2A和MYC）在体内重编程能否诱导皮肤溃疡表面上皮组织新生，作者进行了皮下注射或直接将表达绿色荧光蛋白的AAV（GFP-AAV）注射于皮肤原位分离的溃疡来确定哪种AAV可以最高效感染。
Brown等人首先将组织/细胞特异性的 miRNA应用到调控慢病毒载体介导的基因表达上,它们向gfp的 3'UTR 中插入了 miR-142-3p的四个结合位点(miRNA-BS),从而特异性降低目的基因在脾细胞而非肝细胞中的表达。另外科学家构建的,含有miR-122 和 miR-199a 结合位点的 ...
AAV8BP2-GFP、AAV2-GFP、AAV8-GFP)注射到小鼠耳蜗,发现人工合成的AAV2.7m8能够高效感染耳蜗HCs(IHCs和OHCs转导效率均在80%以上,图5),且能高效感染Lgr5阳性内柱细胞(转导效率约80%~90%,支持细胞的一种)和内指细胞(转导效率约50%~70%,支持细胞的一种)(图6),但是感染前庭毛细胞效率较低(转导效率...
GFP信号仅在心脏中检测到,而在肝脏、脾脏、肺、肾、脑、脾脏或性腺中检测不到(Fig B和C)。相反,当我们在 R26fsCas9−GFP 小鼠中注射相同剂量的AAV9-Tnnt2-Cre载体激活Cre依赖的GFP报告基因时,在约50%的肝细胞中观察到GFP信号(Fig B-C)。在tdTomato报告基因小鼠( R26fsCas9−tdTomato,Fig C)中也观察...
抗AAV中和抗体试验的主要设计原理如下:首先构建一个和基因药物有相同衣壳蛋白的腺相关病毒,AAV-GFP,该病毒能自主表达绿色荧光蛋白。使用AAV-GFP感染细胞,通过检测荧光信号来评判感染的效果。在AAV-GFP感染细胞之前,将其与样本血清进行预先孵育,样本血清中的抗AAV中...
需要优化的参数包括:细胞系(HEK 293、HeLa、CHO、Huh-7)、细胞数量、血清(阴性对照,热灭活)、每个细胞感染的多重性(MOI)(102 ~ 105)、辅助腺病毒或增强AAV转导和表达的化学物质、报告基因(荧光素酶,GFP, LacZ)、孵育时间、和Cut point值(50%的抑制或统计推导的)[16, 19]。 图12 基于细胞的体外方法检测...
在这项研究中，研究团队探索了使用FUSIN通过鼻腔向大脑递送腺相关病毒的效果。研究团队发现，将携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺相关病毒5型（AAV5-hSyn-EGFP）通过聚焦超声（Focused Ultrasound）和微泡（Microbubbles）将GFP地送到了大脑皮层和脑干，由于GFP由神经元特异性启动子hSyn启动，因此不在其他组织和器官中表达。...
值得注意的是,由scAAV编码的GFP或FIX比传统单链AAV载体编码的GFP或FIX表达更快,表达水平更高。2019年,FDA批准了治疗脊髓性肌萎缩(SMA)的基因治疗药物Zolgensma,而scAAV载体正是其重要组成部分,该基因治疗药物由AveXis公司研发,2018年被诺华制药以87亿美元并购。
AAV Single-Strand Split gfp Vector System.Matthew, L. Hirsch
您是否在rAAV构建体中包含了报告基因,例如GFP或mCherry?能够通过荧光测量直接观察到病毒表达发生的位置。如果没有,您可以考虑在驱动您感兴趣的基因的同一启动子下共同注射携带报告基因的AAV,并测量报告基因表达作为您感兴趣的不易检测基因的代表。如果无法进行共表达或共感染,通过免疫组化或原位杂交检测目的蛋白可能是...