为了筛选出能穿透血脑屏障并在整个中枢神经系统中有效转导的AAV血清型,研究者将衣壳文库静脉注射到成年GFAP-Cre小鼠中,这些模式小鼠能够特异性在星形胶质细胞中表达Cre。一周后,从脑和脊髓组织中分离DNA,并设计引物,对有Cre介导重组的恢复衣壳序列顺序的基因组进行PCR扩增。 研究者将整个cap文库克隆到rAAV-cap-in-c...
长期以来,人们构建了大量的组织或细胞特异性表达Cre的小鼠,如Nes-cre、PV-cre、GFAP-cre等,这为通过AAV和工具小鼠联用实现目的基因的细胞特异性表达奠定了基础。原理如图6. A所示,要求AAV必须要带有loxP位点,而工具小鼠中cre的表达必须为细胞特异性。Magdalena Go便采用该策略构建了cre依赖的AAV(AAV-FLEx-Ngn2/Nu...
SOCS-3是细胞因子信号转导抑制蛋白,对多种细胞因子和激素产生的信号转导过程进行负调节。孙等将PTENf/F/SOCS3f/f小鼠视神经夹伤,玻璃体注射AAV-Cre同时敲除PTEN和SOCS3基因,并向玻璃体中添加外源性睫状神经营养因子CNTF,再生的轴突可生长到上丘,并增加了RGCs的存活。 图15 通过注射AAV-cre后敲除PTEN和SOCS3...
一个具有代表性的例子是在CNS星形胶质细胞中起作用的的 2.2 kb 人神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 启动子及其681 bp缩短版本的 gfaABC1D启动子。后者表现出与全长 GFAP 启动子相同的表达模式,甚至比全长 GFAP 启动子的活性高了 2 倍(图4)。此外,一些肌肉特异性启动子也被成功删减,例如肌球蛋白轻链-2v (MLC)...
AAV vectors that efficiently transduce the mouse brain after intravenous injection are generated with a CRE-dependent selection system. Recombinant adeno-associated viruses (rAAVs) are commonly used vehicles for in vivo gene transfer1,2,3,4,5,6. However,
一个具有代表性的例子是在CNS星形胶质细胞中起作用的的 2.2 kb 人神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP) 启动子及其681 bp缩短版本的 gfaABC1D启动子。后者表现出与全长 GFAP 启动子相同的表达模式,甚至比全长 GFAP 启动子的活性高了 2 倍(图4)。此外,一些肌肉特异性...
明亮信号示出了GFP蛋白的表达。数据代表每组2只(AAV-PHP.B)和3只(AAV-PHP.B2和AAV-PHP.B3)小鼠。图9B示出了从GFAP-Cre筛选中回收的个体变体的制备中得到的DNA酶抗性vg的量。产量以每150mm培养皿生产细胞的纯化的载体基因组拷贝的数量给出;平均值+/-s.d.*p<0.05,单向ANOVA和Tukey多重比较检验。柱中...
For retinal explants, RBPMS+, GFP+, and co-labelled cells were counted using the cell counter plugin in Fiji [52], where the image was cropped to the central 200 × 200 µm. Western blot and quantification Four weeks after AAV injection, eyes were removed, and retinas carefully ...
选择病毒载体用于使用表达具有上游loxp/stop位点的报告基因(例如,绿色荧光蛋白)的细胞的转基因表达(高灵敏度cre表达),由此防止报告基因表达直至aav载体递送的cre移除终止位点。可分离报告基因阳性细胞,回收的aav衣壳序列将具有更高的介导有效转基因表达的可能性。本文还描述了在中枢神经系统(cns)和周围神经系统(pns)、...
AAV是一种不致病的病毒，与人体免疫系统相容性好，因此在临床应用中具有较高的安全性。在眼科领域，AA...