综合AVV制备的三个工艺阶段介绍,可以看出下游处理可以占病毒生产总成本的很大一部分,而且难度也是非常大,尤其是纯化过程。原因之一是由于有超过100种不同的变体AAV衣壳,不同血清型的AAV蛋白存在差异。因此,各种血清型的表面特性增加AAV纯化难度。原因之二是:针对工艺和产品相关的杂质(包括宿主细胞物质,DNA和空衣壳),...
腺病毒(AAV)载体大规模纯化工艺 引言 腺病毒载体疫苗背景介绍 腺病毒是一种无包膜的双链 DNA 病毒,可以作为基因递送载体应用于疫苗研发,具有宿主范围广、对人致病性低、无插入致突变性、可激活天然免疫、能激活较高水平的体液免疫细胞免疫、在黏膜处即可进行免疫等,因此...
由于空壳和完整病毒的等电点(pIs)仅有微小差异,因此只有高分辨率阴离子交换树脂才能有效地分离空和完整病毒(例如,Thermo Scientific™ POROS™ HQ(图6)。 POROS CaptureSelect AAVX亲和填料和POROS离子交换填料能够将AAV从工艺和产品相关的杂质中分离出来,这些填料可以轻松地整合到大规模生产平台,从而减少了AAV纯化所...
Grifman等人通过插入NGR多肽基元来设计AAV2衣壳,使得AAV2能够更高效、更特异性地将治疗药物传递给肿瘤细胞。 腺病毒在基础和实验研究有这么强的生命力原因在于:宿主范围广,对人致病率低;腺病毒粒子相对稳定,病毒基因重排频率低;安全性高,不整合到染色体中,无插入致病基因,不干扰其他宿主基因。 AAV生产流程简介 AVV...
整个AAV载体制备的工艺流程可以大致分为3个部分:上游培养、下游纯化和成品包装。其中上游培养和下游纯化中,涉及了更多的生产步骤、技术更加复杂,这里我们将做重点探讨。 一、上游培养: AAV上游培养主要包括4个步骤:①质粒的生产制备;②产病毒细胞的扩增;③质粒的转染;④发酵产病毒。
AAV的生产通常使用三个单独的质粒进行病毒生产。然后,通过化学或机械裂解生产细胞并用核酸酶处理去除任何游离DNA来收集病毒后,将瞬时转染的细胞生产病毒数天[4,8]。然后将细胞裂解物移至下游过程以进行病毒纯化。 每种病毒的工艺开发都有其独特的挑战,AAV也不例外。将病毒与工艺和产品相关的杂质分离(如细胞裂解后留...
图3:AAV制备过程中所产生的病毒颗粒类型 可见,如何更好地考察产品相关杂质以及提升过程相关杂质的去除效率是AAV纯化工艺所面临的挑战。基于此,瑞普利金联合生物制品圈将于11月22日(周三)19:30-20:30进行关于“AAV下游工艺开发的挑战与应对策略”的线上直播。本次直播邀请了瑞普利金下游应用技术专家王凯晨老师和和元...
综合AVV制备的三个工艺阶段介绍,可以看出下游处理可以占病毒生产总成本的很大一部分,而且难度也是非常大,尤其是纯化过程。原因之一是由于有超过100种不同的变体AAV衣壳,不同血清型的AAV蛋白存在差异。因此,各种血清型的表面特性增加AAV纯化难度。原因之二是:针对工艺和产品相关的杂质(包括宿主细胞物质,DNA和空衣壳),...
整个AAV载体制备的工艺流程可以大致分为3个部分:上游培养、下游纯化和成品包装。其中上游培养和下游纯化中,涉及了更多的生产步骤、技术更加复杂,这里我们将做重点探讨。 一、上游培养: AAV上游培养主要包括4个步骤:①质粒的生产制备;②产病毒细胞的扩增;③质粒的转染;④发酵产病毒。
图3:AAV制备过程中所产生的病毒颗粒类型 可见,如何更好地考察产品相关杂质以及提升过程相关杂质的去除效率是AAV纯化工艺所面临的挑战。基于此,瑞普利金联合生物制品圈将于11月22日(周三)19:30-20:30进行关于“AAV下游工艺开发的挑战与应对策略”的线上直播。本次直播邀请了瑞普利金下游应用技术专家王凯晨老师和和元...