采用PDGF(50 ng/mL)处理小鼠 3T3 细胞 0~60 min。通过 SDS-PAGE 在 7.5% 凝胶上分离全细胞裂解物的总蛋白,转移至 PVDF 并在 5% 的 TBST 溶解的脱脂奶粉溶液中封闭。分别用含 2 μg/mL 抗 AKT1(NBP2 - 01725)和 2 μg/mL 抗 pS473 AKT1(NB100 - 56749)抗体检测。用化学发光法检测显示信号。 为...
采用PDGF(50 ng/mL)处理小鼠 3T3 细胞 0~60 min。通过 SDS-PAGE 在 7.5% 凝胶上分离全细胞裂解物的总蛋白,转移至 PVDF 并在 5% 的 TBST 溶解的脱脂奶粉溶液中封闭。分别用含 2 μg/mL 抗 AKT1(NBP2 - 01725)和 2 μg/mL 抗 pS473 AKT1(NB100 - 56749)抗体检测。用化学发光法检测显示信号。 为...
以下是制作SDS-PAGE凝胶的基本配方和制胶步骤: 配方: 1. 1%丙烯酰胺(Acrylamide)溶液:将3.7g丙烯酰胺和60μl N,N'-亚甲基双丙烯酰胺溶解在0.5ml双蒸水中,搅拌均匀。 2. 2.5%BT(Bis-Tris)溶液:将0.1g BT和0.25ml TBE(三酸乙酸盐电泳缓冲液)混合均匀。 3. 10%过硫酸铵(AMS)溶液:将10μl AMS溶解在1...
10%凝胶聚合催化剂0.050.10.150.20.30.5 TEMED0.0020.0040.0060.0080.0120.02 注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶): 成分配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(mL) ...
[上一个:5×SDS-PAGE无气味蛋白上样缓冲液(常用)] [下一个:2×SDS-PAGE非变性蛋白上样缓冲液(不含SDS)] 5×SDS-PAGE非还原性蛋白上样缓冲液(不含还原剂) 详情说明5×SDS-PAGE非还原性蛋白上样缓冲液(不含还原剂) 货号:ZK-PL3732 规格: 5ml 25ml 储存: -20℃保存 12个月有效0755...
PAGE电泳原理 ➢分子筛效应:分子大小和形状 ➢电荷效应:大部分的蛋白质在pH8.3电泳缓冲液的条件下 带有负电荷,表面负电荷多的蛋白质迁移快,反之则慢 (强阴离子去污剂SDS使蛋白结构松散,并带上大量负电荷,导致本身电荷差别消失,因此SDS-PAGE分离蛋白主要依赖分子大小,而非电荷或形状)➢不连续系统具有对...
3)转移膜和凝胶不幸干涸了。一般转膜前可将凝胶放在缓冲液里平衡一下防止胶变形,也有助于进一步去掉有碍转膜的杂质。也可在这一步通过浸泡对蛋白复性并直接检测蛋白活性。 4)转移缓冲液中甲醇浓度过高,可使蛋白质与SDS分离,从而沉淀在凝胶中,同时也会使凝胶收缩或变硬,抑制高分子量蛋白的转移。此时可降低甲醇浓度...
成分15%胶 蒸馏水 配制不同体积 SDS-PAGE 分离胶所需各成分的体积(毫升) 5 10 15 20 25 30 40 50 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%Acr-Bis(29:1) 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 1.5 M Tris,pH8.8 1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25...
A:在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场...
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