1、宝生物工程(大连市)有限公司,116600 Takara生物技术(大连)有限公司,CDNA 5,(5 Race法),单边快速扩增法,(Race 5段al单链cDNA自身连接。PCR放大5未知区域。目的塑料切割回收DNA片段。DNA序列测定。体外转录PSPtet RNA。配制PSPtet RNA和总RNA的混合样品。5个设计合成引物。使用5 RACE方法获得PSPtet RNA的5个端...
其原因在于MarathonTM技术反转录反应往往不能真正达到 mRNA的5'末端。所以认为,进行RACE反应应当优选SMARTTMRACE试剂盒。以下 就国内目前应用最广的SMARTTMRACE试剂盒为例,简要概述RACE技术的原理和操作 过程。 SMARTTM3'-RACE原理 利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核苷 酸序列通用...
一、BCR 5′RACE技术的原理。 这个技术的原理,就好比你要找一本书里最开头的那一页。你知道吗,在我们的身体里,有一种特别特别小的东西,叫基因。基因就像一本本装满了各种神奇密码的书,这些密码能决定我们长得高还是矮,眼睛是大还是小等等好多好多事情。 可是,有时候我们想知道这本书最开始讲了什么,也就是基...
5’-RACE技术的意义：可以精确定位转录起始位点。但是定位转录起始位点又有什么意义呢？以RNA聚合酶Ⅱ为例，启动子区一般位于转录起始位点上游200-300bp的范围内，也即转录起始位点的确定有助于分析基因的转录。而且有些基因具有多个转录起始位点，通过5’-RACE技术可以精确定位之，进而详细研究基因的调控机制。5’-...
RACE的另一种代表方法-Self-Ligation法 1. 反转录(RT)反应。 2. Hybrid RNA的分解。 3. 单链cDNA的自身连接。 4. PCR扩增5'未知区域。 5. 目的DNA片段的切胶回收。 6. DNA序列测定。 原理见Figure 3。 Figure 3.
5’-RACE 技术的意义: 可以精确定位转录起始位点。 但是定位转录起始位点又有什么意义呢? 以 RNA 聚合酶Ⅱ 为例, 启 动子区一般位于转录起始位点上游200-300bp 的范围内, 也即转录起始位点的确定有助于分析基因的转录。 而且有些基因具有多个转录起始位点, 通过 5’-RACE 技术可以精确定位之, 进而详细研究...
利用RACE可以通过已知的部分cDNA序列来得到完整的cDNA的5′和3′端。RACE的特点是在仅已知单侧序列可供设计特异性引物时,应用RACE技术仍能完成扩增,因此RACE技术也成为单侧PCR。 RACE原理 RACE包括3′RACE和5′RACE,分别用于cDNA3′端和5′端的扩增。根据已知序列设计特异性引物,利用3′RACE获得3′端序列(基因...
原理: RACE是采用PCR技术由已知的部分cDNA顺序来扩增出完整cDNA5’和3’末端,是一种简便而有效的方法,包括单边PCR和锚定PCR。 操作步骤: 1、3’RACE-PCR 3’-RACE的步骤是:利用mRNA的3’末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核营酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准...
1、dT5, -RACE技术的意义:可以精确定位转录起始位点5,-RACE技术的意义:可以精确定位转录起始位点。但是定位转录起始位点乂 有什么意义呢, 以RNA聚合酶?为例, 启动子区一般位于转录起始位点上游200- 300bp的范围内,也即转录起始位点的确定有助于分析基因的转录。 而且有些基因 具有多个转录起始位点,通过5 -RACE技...
5’-RACE技术的意义:可以精确定位转录起始位点。但是定位转录起始位点又有 什么意义呢?以RNA聚合酶Ⅱ为例,启动子区一般位于转录起始位点上游 200-300bp的范围内,也即转录起始位点的确定有助于分析基因的转录。而且有 些基因具有多个转录起始位点,通过5’-RACE技术可以精确定位之,进而详细 研究基因的调控机制。 5’...