基础培养基，胎牛血清，胰蛋白酶，PBS，6孔板（或培养皿），4%多聚甲醛固定液，结晶紫染液，无菌移液枪和枪头、细胞计数板等细胞培养耗材。（2）操作步骤 ① 细胞准备：将细胞或预处理好的细胞用胰蛋白酶正常消化后收集，用完全培养基重悬为单细胞悬液，并计数；② 细胞接种：将细胞悬液浓度调整为1000个细胞/...
流式细胞多聚甲醛固定步骤 1.把细胞悬浮液放在一个离心管中,使其离心分离; 2.将离心管中的上清液放入一个新的离心管中,用 PBS 洗涤; 3.将细胞悬浮液加入甲醛溶液中,搅拌均匀,使细胞表面上的蛋白质与甲醛发生共价键结; 4.将混合物离心分离,将上清液放入新的离心管中,用 PBS 洗涤; 5.将悬浮液中的细胞放入...
4%多聚甲醛(临用前配制)、PBS。 2.操作步骤 (1)PBS配制4%多聚甲醛; (2)用PBS洗涤细胞2次,用200g离心5min;重悬细胞。 (3)小心用4%多聚*悬浮细胞,细胞浓度约为1X106/m1 15min,间或摇动; (4)200g离心5rain,用PBS重悬细胞,重复洗涤细胞2次;室温下静置 (5)用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透...
软琼脂克隆形成实验:适用于悬浮生长的细胞,将细胞悬液与软琼脂混合,利用软琼脂为培养介质,形成克隆。 图3. 软琼脂克隆形成制备过(DOI:10.3791/52727) 4.实验步骤 1.平板克隆形成实验 (1)所需材料 基础培养基,胎牛血清,胰蛋白酶,PBS,6孔板(或培养皿),4%多聚甲醛固定液,结晶紫染液,无菌移液枪和枪头、细胞...
软琼脂克隆形成实验:适用于悬浮生长的细胞,将细胞悬液与软琼脂混合,利用软琼脂为培养介质,形成克隆。 图3. 软琼脂克隆形成制备过(DOI:10.3791/52727) 4.实验步骤 1.平板克隆形成实验 (1)所需材料 基础培养基,胎牛血清,胰蛋白酶,PBS,6孔板(或培养皿),4%多聚甲醛固定液,结晶紫染液,无菌移液枪和枪头、细胞...
多聚甲醛-戊二醛混合固定液(4%/1%) 产品货号:R23032 产品规格:500ml 产品简介: 固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构,固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变,从而使酶失活。固定液分为醛类固定液、汞类固定...
3、用 3 %多聚甲醛 50 μ l 重悬细胞,室温下固定 10min 。 4、PBS 洗 1 次, 500 ～ 1000r/min 离心 5min 去 PBS 。 5、用 15 μ l 的 Hoechst33258 或 33342 重悬细胞,终浓度为 16 μ g/ml ,孵育 15min 。 6、取 10 μ l 放在玻片上,荧光显微镜下观察,可数 500 个细胞,计算调亡率。
软琼脂克隆形成实验:适用于悬浮生长的细胞,将细胞悬液与软琼脂混合,利用软琼脂为培养介质,形成克隆。 图3. 软琼脂克隆形成制备过(DOI:10.3791/52727) 4.实验步骤 1.平板克隆形成实验 (1)所需材料 基础培养基,胎牛血清,胰蛋白酶,PBS,6孔板(或培养皿),4%多聚甲醛固定液,结晶紫染液,无菌移液枪和枪头、细胞...
14、 400-500g离心5min,弃去上清后用200μL FACS buffer 重悬细胞或者使用500μL 4%多聚甲醛固定细胞,冰上孵育40-60min后再检测。 15、使用流式细胞术检测所标记抗体为阳性的细胞比例。(注:上机检测时需先过400目滤布之后再检测) 16、使用流式细胞术分析软件分析活细胞中的CD3+IFN-γ+ 、CD3+CD4+IFN-γ+...
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; ...