1.成脂诱导分化操作1.1 接种干细胞取对数生长期3T3-L1的细胞，按照2.0×10^4cells/c㎡的细胞密度接种至培养器皿，于37℃，5%CO₂培养环境下培养至汇合度90%，弃掉上清，加入成脂诱导分化培养基诱导液。NOTE：如细胞贴壁性较差，建议使用 0.1%明胶对培养底 面进行包被。1.2 细胞分化诱导于37℃，5%CO₂...
诱导完成后,经油红O染色,就可以在镜下观察到甘油三脂脂肪滴的生成。 1.成脂诱导分化操作 1.1 接种干细胞 取对数生长期3T3-L1的细胞,按照2.0×10^4cells/c㎡的细胞密度接种至培养器皿,于37℃,5%CO₂培养环境下培养至汇合度90%,弃掉上清,加入成脂诱导分化培养基诱导液。 NOTE:如细胞贴壁性较差,建议使用 ...
● 3T3-L1细胞添加诱导剂时,手法要特别轻,尽量用枪头贴壁逐滴加入,让液体慢慢流下,这样对细胞的冲击最小,否则极容易造成细胞卷边飘起; ● 细胞代数越多,成脂能力越弱,需要诱导的时间也就越长,可适当增加地塞米松和胰岛素用量; ● 实验中所使用的溶剂遵循现用现配的原则。 ●参考文献● [1] Zebisch K , ...
3T3-L1经典成脂诱导过程 诱导步骤：将融合后的3T3-L1（汇合度100%）细胞从DMEM生长培养基切换到含有0.5mmol/L IBMX(abs817348)、10mg/mL胰岛素和1μmol/L地塞米松的分化培养基中48h。然后将细胞维持在含有10%FBS和10 mg/mL胰岛素的DMEM培养基中48h，之后每隔一天更换常规新鲜培养基，一般第九天染色。PS：不...
● 3T3-L1细胞添加诱导剂时,手法要特别轻,尽量用枪头贴壁逐滴加入,让液体慢慢流下,这样对细胞的冲击最小,否则极容易造成细胞卷边飘起; ● 细胞代数越多,成脂能力越弱,需要诱导的时间也就越长,可适当增加地塞米松和胰岛素用量; ● 实验中所使用的溶剂遵循现用现配的原则。 ●参考文献● [1] Zebisch K , ...
3T3-L1成脂诱导—铺板注意要点 1. 3T3-L1诱导过程中贴壁能力下降，细胞易脱壁，建议在铺板前使用0.1%明胶包被，可有效改善细胞贴壁能力。2. 3T3-L1起始密度不宜过低，一般为90%-100%，过低的铺板密度会导致脂滴较少。3. 使用对数生长期的细胞进行诱导，一般复苏后建议至少传代1次再进行铺板。3T3-L1诱导前起始...
3T3-L1成脂诱导“鸡尾酒”策略 图2 3T3-L1细胞(正常)和3T3-L1成脂分化后(对照) 一般认为,细胞的增值和分化呈负相关,细胞开启分化必先退出分裂增值周期,常用的方法就是让其生长至融合期,出现接触抑制。脂肪生成是一个将碳水化合物和其他底物转化为脂肪酸,然后作为TAGs(甘油三酯)储存起来的过程。
3T3-L1成脂诱导—铺板注意要点1. 3T3-L1诱导过程中贴壁能力下降,细胞易脱壁,建议在铺板前使用0.1%明胶包被,可有效改善细胞贴壁能力。 2. 3T3-L1起始密度不宜过低,一般为90%-100%,过低的铺板密度会导致脂滴较少。 3. 使用对数生长期的细胞进行诱导,一般复苏后建议至少传代1次再进行铺板。 3T3-L1诱导前起始密度...
3T3-L1细胞是一种源自小鼠胚胎的成纤维细胞系,因其具有体外分化为类脂肪细胞的能力,成为研究肥胖和糖尿病等代谢性疾病的重要工具。以下为详细的成脂诱导分化步骤:1. 细胞准备:首先,将3T3-L1细胞正常培养至融合度达到80~90%,随后用胰酶消化并计数。 2. 接种细胞:以2~3×10^4cells/cm^2的密度将细胞接种于六孔...
3T3-L1成脂诱导—铺板注意要点 1. 3T3-L1诱导过程中贴壁能力下降,细胞易脱壁,建议在铺板前使用0.1%明胶包被,可有效改善细胞贴壁能力。 2. 3T3-L1起始密度不宜过低,一般为90%-100%,过低的铺板密度会导致脂滴较少。 3. 使用对数生长期的细胞进行诱导,一般复苏后建议至少传代1次再进行铺板。