3-AT 是酵母HIS3蛋白(His3p)的竞争性抑制剂,HIS3是酵母单杂,双杂,三杂实验的报告基因,HIS3报告基因在酵母中会有微弱的泄露表达(泄露表达:指在报告基因没有被互作激活时的本底表达);某些蛋白或DNA片段在酵母中有自激活现象,在没有互作发生时也可以激活报告基因,这种自激活现象导致酵母互作实验产生很多假阳性。为...
在酵母细胞中,3at是一种能够激活蛋白酶C的小分子,具有重要的调控作用。在酵母双杂中,3at还可以与LRR-1蛋白相互作用,在一些生物学过程中发挥着非常重要的作用。 首先,当酵母细胞被外界的压力、温度改变等不良环境刺激时,3at与LRR-1蛋白相互作用,在细胞内部诱导一系列应激反应,促进其适应恶劣环境的生存能力。这一...
1. 酵母3at母液可以用高温的水进行溶解。2. 酵母双杂交系统是一种用于研究蛋白质间相互作用的实验方法。3. 该系统通过将两种目标蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒中。4. 这些质粒含有转录激活因子的DNA结合结构域和激活结构域基因。5. 构建融合表达载体后，通过分析表达产物来探究两种蛋白质间是否存...
不是酵母双杂交技术的基本原理1989年,Song和Field建立了第一个基于酵母的细胞内检测蛋白间相互作用的遗传系统。
用高温的水溶解就可以。酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质的基因，分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子。如GAL4等的DNA结合结构域基因和转录激活因子（如GAL4等）激活结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。
3-AT溶液为经过过滤除菌的即用型母液,用于酵母杂交实验抑制本底表达,用以准确筛选出蛋白互作引发的His的报告基因的表达。 使用方法: 1.计算所需平板的数量,计算配置培养基体积;2.设置3-AT的浓度梯度(建议10-50 mM 的浓度范围设3-5个梯度,常用浓度约30 mM);3.灭菌筛选培养基,待培养基冷却到55 ℃左右,加入3...
目前，酵母双杂交及其衍生技术已被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域，成为分子生物学研究领域的重要实验手段，同时国内外科研工作者通过该技术揭示了大量已知或者未知蛋白相互作用的分子机制。正和生物致力于科研的最前沿，在构建核体系酵母文库和膜体系酵母文库均有丰富的经验，熟练运...
应用实例(用于酵母单杂或双杂筛选系统) 应用背景: 当用HIS3作为报告基因的酵母杂交筛选中,HIS3会有一定程度的泄露表达,导致背景过高的发生,此时需在筛选培养基内加入HIS3酶竞争性抑制剂——3-AT(MX7458)降低背景表达。需注意的是,加入过高浓度的3-AT,蛋白间存在较弱的相互作用会被抑制,因此,强烈建议针对自身系...
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