3' RACE法基于逆转录反应和PCR扩增两个步骤: 1.逆转录反应:首先,使用一个3'末端特异性引物(anchor primer)和逆转录酶,将RNA转录为cDNA。引物通常包含一个寡聚体核苷酸序列,可在逆转录过程中特异性地结合到RNA的3'末端。 2.PCR扩增:对逆转录反应产生的cDNA进行PCR扩增。通常使用特异性引物(gene-specific primer...
【答案】：PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3'或5'末端之间区域的部分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术。如果已知目的mRNA的一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物，用原先存在的poly(A)尾(3'末端)或附加的同聚尾(5'末端)互补的序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列...
产品及特点 研究真核基因的最基础的工作之一就是确定其转录终止位点,目前最通用的方法是3′-RACE 法,RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)是 Frohman发明的、通过 PCR 快速克隆 cDNA 末端的技术,它在不建立 cDNA 文库的前提下,利用已知 cDNA 序列设计引物,通过往两端延伸和扩增获得其 3′-端序列。本试剂盒就...
简述3’-RACE。相关知识点: 试题来源: 解析 3’RACE用于mRNA已知序列下游(即3’端)未知序列的扩增,可分为两步。 (1)以与polyA尾巴互补的序列为引物, 反转录获得3’末端第一链cDNA序列。 (2)以靠近第一链cDNA3’端的序列为特异引物合成cDNA第二链,再PCR扩增。 A.反转录获得3’末端第一链cDNA:3’末端...
PCR 仪 水浴箱预设水温在 75℃ 二、方法 反转录 在实验开始时,首先要确定 3'-RACE 是否成功。如果反转录步骤是有效的,那么分离到含有靶 mRNA 的 3' 末端序列的克隆的几率是高的。另一方面,如果反转录步骤是无效的,那么本方案的后续步骤是无法弥补的。因此,对于反转录反应条件是值得花时间优化的,如最佳的引物...
根据已知的草地夜蛾Spodopterafrugiperda的泛素延伸基因 5′端核苷酸序列设计引物 ,应用 3′RACE PCR技术 ,从甜菜夜蛾S .exigua脂肪体组织总RNA中反转录扩增泛素基因的cDNA片段.扩增得到的片段全长 5 13bp ,3′末端有 12 3bp的非翻译区 ,翻译区编码一个长为 12 9个氨基酸残基的蛋白质 ,预测分子量为 14 8kD....
RACE是基于PCR技术基础上由已知的一段cDNA片段,利用锚式PCR,快速扩增cDNA末端从而获得已知mRNA内一段小序列与3' 的cDNA序列技术。 服务流程: RNA提取-测浓度-逆转录-PCR方法进行已知序列验证-进行cDNA合成-巢式PCR进行3' 未知序列扩增-胶回收-TA克隆-测序-数据分析-发送实验报告。 样本要求及运输条件: 1、组织样...
RACE (rapid-amplification of cDNA ends),即cDNA末端快速克隆技术。RACE基于PCR技术基础之上,先由RT-PCR从RNA中获取cDNA片段,再通过设计引物与PCR向两端延伸扩增从而获得完整的3’端或5’端序列,是一种从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5’和3’末端的有效方法。相比于
1、RACE技术-引物设计基因特异性引物(GSPs )应该是:1、2328nt2、5070%GC3、Tm值65度,Tm值70度可以获得好的结果需要实验者根据已有的基因序列设计5和 3RACE反应的基因特异性引物(GSP1和GSP2),由于两个引物的存在,PCR的产物是特异 性的。4、cDNA的合成起始于polyA+RNAo如果使用其它的基因组DNA或总RNA,背景会很...
刚开始按部就班的做,先用GSP1- 3’Primer去扩增 ,再用GSP2- 3’Nested Primer做巢式 PCR 。也遇到了RACE常见的问题,3’-race第一轮PCR目的条带非常弱(没法回收),还伴有严重的smear。 这就要解决二个问题:① 减少非特异性扩增。 ② 增加目的片段的...