按照特定实验处理后的细胞,弃去上清培养基,用pbs洗涤1次;根据细胞沉淀的量加入相应的细胞裂解液,于冰上反复冻融裂解3次,期间不停吹打;4℃、15000rpm/min离心10min,取上清弃沉淀用于后续实验。bca蛋白定量后加入5×上样缓冲液,置于100℃金属干热仪中煮5min;直接进行聚丙烯酰氨凝胶(sds-page)电泳,或者取出后置于...
85中裂解。离心除去细胞碎片后,上清和UltraLinkStreptavidin树脂Pierce在4°C旋转孵育过夜。生物素标记的蛋白通过离心收集,并用细胞裂解缓冲液洗3遍。蛋白在2XSDS-PAGE上样缓冲液中75°C变性30分钟,并用GluRl抗体(13185,CellSignaling,1:500稀释)和GluR2抗体(13607,CellSignaling,1:500稀释进行免疫印迹分析。[0145]17...
pbs缓冲液悬浮细胞,超声破碎细胞后,5000r/min离心10分钟,取0.3ml上清液按照加入谷胱甘肽测量试剂,使用酶标仪在波长405nm处测定各孔吸光度值。 55.1.8荧光显微镜 56.不同处理组后,使用4%多聚甲醛室温下固定细胞20 ‑ 30分钟,使用0.5%triton x ‑ 100破膜15分钟后,加入1%bsa牛血清蛋白孵育30分钟,结束后使用相...
图29i示出了分别在hek-293细胞中过表达的wt(在10μm时n=4,并且在7μm时n=5)和r103e突变体(在10μm时n=5,并且在7μm时n=6)中在10μm(左图)和7μm(右图)时被sn-406阻断的最大外向电流的百分比平均值。数据被表示为平均值 ± sem。使用双尾非配对t检 验,其中*、**和***分别表示p《0.05、p...
代表图在上部(标尺,50μm),下部,荧光强度以dmso组矫正。dmso,n=8;apv/ttx,n=11。(b)在原代神经细胞1μm和100μmttx处理后,与空载或者t508e突变体相比,导入ube3a显著降低了rare-hrgfp信号。相对荧光强度代表图在右侧显示。vector,n=11;ube3a,n=14;t508e,n=12.标尺:40μm。(c)1μm和100μmttx的...