对于两种类型的Percoll离心,均需加入1X HBSS进行洗涤,以300 g离心10分钟,然后重悬于10 ml 1X红细胞裂解缓冲液中,最后将细胞沉淀重悬于50μl封闭缓冲液中,该封闭缓冲液由1X PBS、0.5%牛血清白蛋白(BSA)和2 mM EDTA配制而成。 流...
二、实验材料和仪器 1. DAPI 染料溶液:DAPI 染料溶液可以通过商家购买或自行配制。 2. PBS 缓冲液:含有 1.37 M NaCl , 27 mM KCl , 80 mM Na2HPO4,14.4 mM KH2PO4,pH 7.4。 3. 4% 甲醛溶液:用于固定细胞。 4. 0.1% Triton X-100:用于细胞膜的渗透。 5. 阻断液:如 3% BSA(牛血清白蛋白)。 6...
实验溶液配制:硅烷化试剩:将OTCS与异辛烷混合作为硅烷化试剂,体积比为0.1%-1%均可,现用现配。芯片刻姓液分别量取HF16mL、NH4F7.4g.HNO319.2mL.去离子水364.8mL在塑料器皿中混勻,配置成摩尔浓度比HF:NH4F;HNO3为1:0.5:0.75的芯片刻烛液,常温保存,可重复使用。光刻显影液:称取0.7gNaOH固体溶解于100...
6.(可选)细胞悬液质量优化:如果样本在解离后出现「粘性」(释放 DNA),DNase 处理;如果要去除红细胞或死细胞,按说明书使用红细胞裂解液或去死细胞试剂盒;如有大量细胞碎片,按说明书使用碎片去除溶液。 7. 分选缓冲液配制:配置含有 0.5% BSA 的 PBS(p2),可使用 PBS...
1.2 缓冲液配制 包被液:PBS(磷酸盐缓冲液);封闭液:1% BSA,5%蔗糖,0.05%叠氮钠/PBS;洗涤液:0.05% Tween-20/PBS;酶结合物稀释液:1%BSA/PBS;显色剂:R&D公司 Substrate Reagent(DY999);终止液:1 mol/L硫酸 1.3 细胞培养 人肺腺癌细胞A549为烟台大学分子药理实验室保种。用含 10%胎牛血清的 RPM I 1640培...
一、细胞电转染缓冲液的制备方法 1.材料准备 (1) 6 mM HEPES缓冲液(pH 7.4) (2) 0.75 M KCl溶液 (3) 2 mM CaCl2溶液 (4) 0.1 mM EGTA溶液 (5) 10 mM MgCl2溶液 (6) 10 mM K2HPO4溶液 (7) 50%甘露醇溶液 2.缓冲液的配制 (1)将6 mM HEPES溶液调节至pH 7.4。 (2)各种溶液按照相应的比例...
先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。 3) *天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。 4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。 5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞...
1.细胞培养一般步骤如下: 1)用PBS或者无菌水将poly-L-lysine配制成浓度为0.1 mg/mL的溶液后进行无菌过滤。 2)将过滤后的poly-L-lysine溶液倒入培养器皿,使用量为0.5~1.0mL/25cm2,轻轻摇晃,使其均匀覆盖在培养器皿表面。 3)5~10min后,用移液器吸出溶液,用PBS清洗培养器皿表面。
(1)5×SDS-PAGE电泳缓冲液的配制:Tris碱15.1g,超纯水600mL,甘氨酸94.0g,10%SDS 50mL,超纯水350mL; (2)10×转膜液配方:Tris 15.1g,甘氨酸72.0g,SDS 1.85g,超纯水400mL,搅拌至完全溶解后定容至500mL。 (3)10×TBS溶液:NaCl 236g,Tris 72.6g,超纯水2L;搅拌至完全溶解后定容至3L,浓盐酸调pH7.6。 (4)TB...