[0005]高GC含量或以复杂结构DNA为模板的DNA片段的重叠延伸PCR法,其具体制备步骤包括: 1、两个DNA小片段的连接,其具体步骤包括: 步骤一、根据所需融合的两个DNA小片段设计引物,两个相邻DNA小片段的两对引物的末端设计一个重叠区段,长度为22-26bp,引物重叠区的Tm值与各引物与模板特异性结合部分的Tm值一致;然后...
摘要 高GC含量或以复杂结构DNA为模板的DNA片段的重叠延伸PCR法,根据所需融合的两个DNA小片段设计引物,两个相邻DNA小片段的两对引物的末端设计一个重叠区段;采用所设计的引物,以所需融合的全长基因为模板,分别进行平行的PCR,PCR设置为5-8个循环,得到两组PCR产物所得PCR产物进行等摩尔混合后作为模板,然后加入...