8️⃣ 切除股骨和胫骨两端的骨骺,用23G针从末端进入骨髓。 9️⃣ 将骨髓冲洗到细胞培养皿中,每根骨头缓慢注射约2-3 mL DMEM,直至骨髓腔变白。确保DMEM不回流,以避免污染。培养基为DMEM+10% FBS+1% 双抗+ 100 ng/mL M-CSF1。 🔟 培养1天后,将悬浮细胞液吸取至non-treated培养皿中。 1️⃣1...
2）骨髓吹出操作：分离洗净的股骨、胫骨，消毒剪剪断两端；用1mL注射器吸取冷诱导培养基，对准断端吹骨髓，反复吹洗约3次，至腿骨内无明显红色。3）细胞分散与过滤筛选：用5mL移液枪轻柔吹打含骨髓细胞的培养基，分散细胞团块；悬液过70μm细胞滤器，滤除杂质，转移至15mL离心管。4）离心及重悬处理：1500rpm/min...
巨噬细胞(Macrophages)是一种位于组织内的白血球,源自单核细胞,单核细胞来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞在生物体内扮演着多重角色,它们可以吞噬和清除异物和衰老死亡细胞、分泌生物活性物质、调节血细胞生成和参与免疫应答等,是一类在体内发挥重要免疫效应的细胞,并且也是实验室最-常用的细胞种类之一。 骨髓来源巨噬...
2)骨髓吹出操作:分离洗净的股骨、胫骨,消毒剪剪断两端;用1mL注射器吸取冷诱导培养基,对准断端吹骨髓,反复吹洗约3次,至腿骨内无明显红色。 3)细胞分散与过滤筛选:用5mL移液枪轻柔吹打含骨髓细胞的培养基,分散细胞团块;悬液过70μm细胞滤器,滤除杂质,转移至15mL离心管。 4)离心及重悬处理:1500rpm/min离心5min...
1000rpm/min,离心10min,弃上清液,重复两次。(清洗细胞) 4.细胞种板 最后一次离心后,弃上清,向管中加入含有10ng/ml的M-CSF的DMEM完全培养基重悬细胞,诱导骨髓细胞分化为巨噬细胞。 细胞计数,调整细胞密度至1x10^6个/ml,将细胞接种于培养皿中。放置在温度为37℃、5%CO2培养箱中培养,待后续研究。
1. 小鼠骨髓细胞的获得 1.1 小鼠(6~8周)颈椎脱臼法处死，将处死的小鼠放于含有酒精的小烧杯中浸泡2...
小鼠骨髓来源的巨噬细胞（Bone marrow-derived macrophages, BMDM）。它最大的优点在于它是原代细胞，其性状和功能更贴近与小鼠机体本身的巨噬细胞，被广大研究人员充分肯定并接受。其次每次试验先用现提，避免了实验室祖传细胞株培养变异的情况，试验结果稳定可靠。实验所需的动物、试剂和相关器械 实验动物：6-8周龄...
(10)a加入含有 20%FBS/ DMEM 的细胞培养液重悬细胞,到该步骤提取完毕。b 加入含有20ng/ml的M-CSF的 20%FBS/ DMEM 细胞培养液重悬细胞,诱导骨髓细胞分化为巨噬细胞。细胞计数,调整细胞浓度至 1×106/mL。接种75cm2细胞培养皿中。 (11)放于 37℃、5%二氧化碳饱培养箱中培养,待后续实验研究。©...
巨噬细胞M1型极化目的探讨猫爪草(RTR)醇类提取物对于小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)极化的影响.方法提取6~8周BALB/c雌鼠骨髓细胞,用DMEM完全培养基(含有20 ng/mL GM-CSF)培养7 d诱导为BMDM.用CCK8摸索RTR刺激巨噬细胞的最适浓度,并观察巨噬细胞的形态变化.ELISA检测细胞培养液中iNOS,TGF-β,TNF-α,IL-10的...
目的探讨猫爪草(RTR)醇类提取物对于小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)极化的影响.方法提取6~8周BALB/c雌鼠骨髓细胞,用DMEM完全培养基(含有20 ng/mL GM-CSF)培养7 d诱导为BMDM.用CCK8摸索RTR刺激巨噬细胞的最适浓度,并观察巨噬细胞的形态变化.ELISA检测细胞培养液中iNOS,TGF-β,TNF-α,IL-10的变化;qRT-PCR检测细...