答:原理:在单链DNA合成链延伸过程中,若以dNTP为原料,新掺入的脱氧核苷酸5’-P与前一个核苷酸戊糖的3’-OH以磷酸二酯键相连,可使链不断延伸。但若在反应体系中加入ddNTP,可替代具有相同碱基的dNTP,但由于ddNTP不具有3’-OH,下一个核苷酸不能与之连接,使得DNA链的合成终止。因此,可以特定的放射标记,通过放射自...
简述DNA 链末端合成终止法( Sanger 法)的基本原理。 答: DNA 链末端合成终止法基本原理是:将 2 ' , 3 ' - 双脱氧核苷酸 (ddNTP) 代替部分 dNTP 作为底物掺入到新合成的 DNA 链中,由于 ddNTP 缺乏 3 ' -OH ,一旦 ddNTP 掺入到 DNA 链中,就不能与下一核苷酸形成磷酸二酯键,因此合成反应终止。测定时...
链终止法的测序原理基于核酸链的复制过程和酶的特性。在DNA复制中,DNA聚合酶是一种能够利用单链DNA作为模板,合成新的DNA链的酶。当聚合酶在复制过程中遇到核酸链的末端时,它会停止合成新的DNA链。这种停止是由于聚合酶需要一个具有3'-OH末端的核苷酸作为起始点。在实验中,通过在DNA复制反应中添加特殊的核苷酸,即...
链终止法测序是一种常用的DNA测序技术,其原理是通过在DNA合成过程中加入ddNTPs来终止合成,从而得到不同长度的DNA片段。这些片段经过分离和扩增后,通过电泳分析得到DNA序列信息。链终止法测序具有高精度、高可靠性、高灵敏度和较长读长等优点,适用于小规模的基因组测序和Sanger重测序等应用。但是,它需要较长的反应时间...
1 ) Sanger 双脱氧链终止法进行 DNA 测序的原理是: 双脱氧核糖核苷三磷酸( ddNTP )不会与正常的脱氧核糖核苷三磷酸( dNTP )形成磷酸二酯键,从而链的随机终止;建立 4 个系统,就可得到 4 个套组( nested sets );在一个胶板上同时电泳,就可读出模板链的互补链的顺序。 ( 3 分) ( 2 )测序的步骤:( 3...
解析:该过程需要借助DNA扩增的技术和原理,故需要借助PCR技术完成,A正确;结合题意“每组按一定比例加入一种底物类似物,它能随机掺入合成的DNA链,一旦掺入后DNA合成立即终止”和题图可知,ddCTP会在C位点终止,ddGTP会在G位点终止,故①对应的终...
【考点】双脱氧链终止法的原理和方法。【解析】英国剑桥大学分子生物学实验室的F.Sanger在1977年发明了用DNA聚合酶的双脱氧链终止原理测定DNA的序列的方法。由于这种方法要求使用一种单链DNA模板和一种适当的DNA引物,因此也被称为引物合成法或酶催引物合成法。【答案】原理:双脱氧的核苷酸是人造的分子,这种分子糖环...
Sanger双脱氧链终止法是DNA测序的基本方法,其原理是:核酸模板在核酸聚合酶、带有3′-OH末端的单链核苷酸引物、四种dNTP存在的条件下复制或转录时,如果在反应系统中分别引人单一种类的ddNTP(即2、3双脱氧核苷三磷酸,在脱氧核糖的3′位置缺少一个羟基,故不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键),只要ddNTP掺入链端,该链就...