b),红色GECI有助于深部组织成像,与GFP等报告基因共表达实现双色成像,也可用与光遗传学与钙成像搭...
由于双光子荧光显微镜和GCaMP6基因编码钙离子指示剂的发展,现在,对树突和树突棘用钙成像实验进行记录也...
MA104细胞,显示为绿色,表达钙指示剂GCaMP6s,其中绿色增加表示细胞内钙增加。在这个活细胞成像视频中,轮状病毒感染的细胞呈红色——Hyser实验室之前报道过,在轮状病毒感染期间,轮状病毒导致受感染细胞内钙的增加,并随后激活邻近细胞中的特定信号通路,从而引发未受感染细胞的细胞内钙信号的增加(Chang-Graham et al., ...
双光子显微镜的运用可将成像深度提升至500微米,适合类器官或组织切片研究。 实验设计的系统性体现在多参数控制:设置空白对照组验证染料特异性,使用离子霉素作为阳性对照确认系统灵敏度,平行开展钙螯合剂实验验证信号特异性。某创新方案将钙成像与膜片钳同步记录,能直接关联电活动与钙动态,但需特殊设计的培养皿与防震台。
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2. 掌握钙成像实验的基本原理和操作方法。 3. 通过实验验证钙信号在细胞内的传递和调控。 二、实验原理 钙成像技术是一种非侵入性的细胞内信号检测方法,通过荧光探针检测细胞内钙离子的浓度变化,从而研究细胞信号转导过程。钙离子在细胞内发挥着重要作用,参与多种生理和病理过程,如细胞凋亡、神经递质释放、肌肉收缩...
膜渗透性盐或葡聚糖注入法:一种将钙离子指示剂引入细胞的方法,适用于特定的实验条件。批量加载法:一种更快速、更便捷地将指示剂引入大量细胞的方法。病毒转染法:通过病毒载体将编码钙离子指示剂的基因转入细胞,实现长期、稳定的监测。应用领域:神经科学:钙成像技术能够实时观察活体生物神经信号的传递...
利用高速颅骨钻在目标脑区制作一个圆形成像区域,小心去除颅骨并保留硬脑膜,之后盖上盖玻片并用胶水封闭缝隙。待胶水凝固后,用ACSF清洗盖玻片并滴加超纯水,便可进行双光子在体钙成像实验。在Timeseries模式下,以2Hz的速度采集图像,并使用ImageJ软件进行分析。此外,还进行了转棒实验和旷场实验以进一步评估小鼠的...
钙成像实验操作 1.钙成像原理 基本原理:利用钙离子指示剂监测组织或细胞内钙离 子浓度,进而反映组织或细胞内某些活动或反应 钙离子指示剂:能够指示钙离子的可视化物质 2. 实验操作 主要试剂及仪器: Fluo-4指示剂,DMSO,F-127,DMEM,HBSS,荧光显微镜或激光共聚焦显 微镜 操作步骤: (1)Fluo-4工作液配制: 每管Fl...
钙成像技术基于钙离子在神经元活动与胞内信号之间的紧密联系。通过特殊的荧光染料或蛋白质荧光探针(钙离子指示剂)将钙离子浓度的变化通过荧光强度表现出来,监测神经元活动。钙离子指示剂主要有化学性钙离子指示剂和基因编码钙离子指示剂两大类。化学性钙离子指示剂如Oregon Green-1、Fura-2、Indo-1、...