重组人白介素-18(rhIL-18)基因工程菌的构建 基因、载体、受体菌株 基因PCR 酶切连接 质粒 质粒提取 载体转化 菌株 实验技术要求 ❖应掌握的实验技术 ▪酶切,连接▪凝胶回收▪制备感受态细胞▪质粒提取▪PCR▪琼脂糖凝胶电泳 ❖考察指标 ▪电泳、蓝白斑数量▪电泳▪感受态细胞转化率▪电泳▪电泳...
(重组载体构建) rhIL-18基因的 PCR产物 载体质粒pUC18 BglⅡ和PstⅠ 双酶切 BamHⅠ和PstⅠ 双酶切 浓度1% 琼脂糖凝胶电泳 凝胶回收纯 化 电泳检验 T4连接酶连接过夜 配制LB液体与固体平板培养 基 灭菌 37℃过夜培养TOP10菌株 溶液回收纯 化 BamHIPstI BglIIPstI 重组载体 Hybridsite PstI BglIIPstI rhIL...
重组人白介素-18(rhIL18)基因工程菌的构建 2015年8月16日 十一、感受态细胞的制备 ➢操作步骤：在超净工作台中，取复苏后的大肠杆菌培养液0.3mL加入到30mL液体LB培养基中，将培养基放入恒温摇床中。37℃，230r/min振荡培养。当菌体生长至对数生长期，即在波长为600纳米时的光吸收为0.4左右。停止培养。在超...
重组人白介素-18(rhIL-18) 基因工程菌的构建 分子生物学实验-理论讲授 基因工程 人白介素18(rhIL-18)基因工程菌的构建实验 基因工程 基因工程的基本概念 基因工程的基本条件 基因工程的操作过程 基因工程的基本概念 基因工程的基本定义 基因工程的主要内容或步骤 基因工程的基本用途 一、基因工程的概念: 利用DNA...
重组人白介素-18(rhIL-18)基因工程菌的构建 分子生物学实验-实验操作 基因、载体、受体菌株 实验技术要求 应掌握的实验技术 酶切,连接 凝胶回收 制备感受态细胞 质粒提取 PCR 琼脂糖凝胶电泳 考察指标 电泳、蓝白斑数量 电泳 感受态细胞转化率 电泳 电泳 电泳 实验流程: 第一天 8AM-5PM (重组载体构建) 实验流程...
Western blot检测了rhIL 18的特异性结合活性; rhIl 18纯化后纯度达95%左右, 并证明rhIL 18能够协同IL 2诱导PBMC分泌IFN γ。结论: 构建了重组hIL 18的基因工程菌, 并在毕赤酵母中实现了高效分泌表达, 为进一步研究其活性和功能奠定了基础。 【关键词】 人白细胞介素18; 毕赤酵母; 表达; 纯化 白细胞介素18...
重组人白介素-18(rhIL-18)基因工程菌的构建 基因、载体、受体菌株 基因PCR 酶切连接 质粒 质粒提取 载体转化 菌株 实验技术要求 ❖应掌握的实验技术 ▪酶切,连接▪凝胶回收▪制备感受态细胞▪质粒提取▪PCR▪琼脂糖凝胶电泳 ❖考察指标 ▪电泳、蓝白斑数量▪电泳▪感受态细胞转化率▪电泳▪电泳...