酵母双杂交实验是一种通过检测蛋白质相互作用关系的方法,其基本原理如下: 引入融合蛋白 首先将两个感兴趣的蛋白质领域分别融合到酵母细胞转录激活因子(BD)和转录发生因子(AD)中,形成两个融合蛋白(BD-fusion和AD-fusion)。 检测蛋白质间的相互作用 将这两个融合蛋白同时引入到同一酵母细胞内,如果这两个融合蛋白存在...
酵母转录因子GAL4由两个结构域组成:DNA结合结构域(BD)和转录激活结构域(AD)。BD能够识别并结合位于GAL4响应基因上游的激活序列(UAS),而AD则可以启动UAS下游基因的转录。只有当BD和AD在空间上充分接近时,GAL4转录因子才具有活性,并能激活下游基因的转录。酵母双杂技术利用这一特性,将AD与X蛋白融合,BD与Y蛋白融合。
拥有BD质粒的酵母可以在某一缺陷培养基上生长，拥有AD质粒的酵母菌可以在另一种缺陷培养基上生长，通过接合（mating）或共转化使酵母同时拥有AD与BD质粒。如果BD上的目的蛋白与AD上的诱饵蛋白存在相互作用，这样的酵母可以在三缺及四缺的培养基上生长，并启动β-半乳糖苷酶基因的转录。图 酵母双杂原理 服务流程 点...
酵母双杂交法（Yeast Two-Hybrid）是一种重要的研究蛋白质相互作用的技术。其核心原理在于利用酵母细胞中的GAL4蛋白的DNA结合域（BD）和激活域（AD）与目标蛋白X和Y进行融合，通过检测报告基因的表达来分析蛋白质间的相互作用。在实施酵母双杂交法时，需要遵循一系列严谨的实验步骤。首先，需要构建包含目标蛋白X和Y与...
酵母双杂交体系就是根据这种原理建立的。酵母双杂交体系包括两种大肠杆菌-酵母菌的穿梭载体(DNA-BD质粒载体和AD质粒载体);和一种特殊的己经缺失了内源GAL4转录因子的酵母寄主菌株。 用途:酵母双杂交体系简称Y2H,是在转录因子结构的基础上发展出来的一种敏感的体内鉴定基因的方法。可用来有效地分离与己知靶蛋白相互...
酵母双杂交,酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列,
酵母双杂交系统（Yeast two-hybrid system）的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域（domain）构成，其中有DNA结合功能域...
酵母双杂互作 1. 酵母双杂交系统的原理与基础 酵母双杂交系统(Yeast Two-Hybrid, Y2H)利用了真核生物转录激活因子的结构特点,这些激活因子通常分为两个独立的功能结构域: DNA特异结合域(BD, DNA-binding domain):负责特异性结合到目标基因的启动子区域。 转录激活域(AD, Activation domain):负责启动下游基因的转...