X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X-α-Gal是酵母α-半乳糖甘酶(MEL1)的反应底物。X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是Gal4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色底物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal...
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶...
因此,这种相互作用可直接通过将酵母菌接种在缺乏组氨酸的选择性培养基上生长,再进行X- gal检测β -半乳糖苷酶的表达来确定(见图1)。 在这里,我们阐述了膜蛋白与可溶性蛋白质或者是两种膜蛋白之间相互作用的在体检测方法。 一个跨膜诱饵蛋白X被融合到一个紧跟Cub结构城相连的人工转录因子之后,从而形成-种蛋白质X ...
3.蓝白斑筛选 在培养基中加入X-α-gal ,这个成分在自然状态下是无色的,但如果诱饵蛋白和猎物蛋白可以结合,组合成一个完整的转录因子后,这个基因会催化X-α-gal发生转化,会将酵母变成蓝色。 ∴经过多筛,能存活,且成蓝色的酵母,里面会有诱饵蛋白和猎物蛋白真正的结合 酵母双杂交技术的优点: 1.高敏感性 即便诱...
2)X-α-Gal是α-半乳糖苷酶(由MEL1基因编码)的底物,当双杂交发生时MEL1报告基因正常表达催化底物发生颜色反应,使得酵母菌落呈蓝色。 3)X-Gal是ß-半乳糖苷酶(由lacz基因编码)的底物。 五、酵母质粒提取试剂盒 【试剂盒工作原理】: 该试剂盒把硅胶柱纯化技术同经典的SDS碱裂解法结合起来,用户可在1小时内从...
答9:不可以,X-Gal与X-Alpha-Gal不同。X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X- Alpha -Gal是酵母α-半乳糖苷酶(Mel1p)的反应底物。X-Alpha-Gal在Matchmaker Gold系统中用作蓝白筛选的筛选底物,在蛋白质互作激活mel1基因表达后,酵母细胞可以分泌表达Mel1p。
几乎所有酵母杂交的实验中,均使用DMF溶解X-α-gal。X-α-gal也溶解于甲醇和DMSO。经过验证酵母杂交的实验中DMSO可以用于X-α-gal的配制与稀释。但DMSO熔点高,使用不便。甲醇还未经验证。 11.杂交效率不高,怎么办? 效率不高,可能是杂交细胞数量不够,适当增加诱饵蛋白的液体培养量,保证有足够的细胞数量。可以延长...
4.将TDO上的克隆,转移到 QDO (forstronginteractionassay)/ 牙签上 剩下的一点点细胞 划在了100ㅠ的TDO(forcolonyX-a-galfilterassay)。 双重选择,在QDO上生长,并在X-a-gal筛选中变蓝的克隆。 5.以上方法,选出223个在 QDO 上生长的克隆。
你们好,我也是一个做酵母双杂交的,我所需的文库买不到,我用的是SYSTEM3 的构建文库和筛选同步进行的试剂盒,我做了BD融合载体的毒性和自激活检测,在SD/TRP/X-GAL上长出白色菌落,但我之后发现单转化BD融合载体的AH109也能在SD/TRP/LEU,SD/TRP/LEU/HIS/ADE的平板长出,我不知道该如何解释,是不是杂菌的背景...
共获得102个蓝色酵母单菌落(X-α-Gal存在时,阳性克隆会变成蓝色)。