膜蛋白酵母双杂交:DUALmembrane技术在传统的酵母双杂交系统的基础上,巧妙地利用分离的泛素系统(split-ubiquitin)进行蛋白质相互作用的筛选;泛素作为降解信号分子,人为分成两部分:N端(Nub),C端(Cub),互补重构的完整泛素分子可被泛素专一性蛋白酶(UBPs)识别,从而导致与泛素相连的蛋白被酶解。 本文仅代表作者观点,不代表...
酵母双杂交技术的原理是将待检测相互作用的两个蛋白质分别融合在BD和AD上,共转化入酵母细胞中。如果这两个蛋白质能够相互作用,则BD和AD会被连接在一起,重建完整的转录激活因子功能,激活报告基因表达。根据报告基因表达产物的出现与否,可以判断待测蛋白质是否存在相互作用。 酵母双杂交技术步骤 酵母双杂交实验的基本步...
2、用质粒自然分选法筛除只含有AD-文库杂合子的克隆 3、酵母杂合试验确定真阳性克隆 4、阳性克隆的进一步筛选和确证 5、对双杂交系统阳性结果的进一步研究 6、阳性克隆的筛选 7、用质粒自然分选法(Natural Segregation)筛除只含有AD-文库杂合子的克隆 8、酵母杂合试验(Yeast Mating)确定真阳性克隆9. 阳性克隆的...
具体实验步骤如下:1.构建酵母表达载体:将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合,在表达载体中得到融合基因。2.构建Gal4转录因子启动子激活报告基因的表达载体:将报告基因与Gal4转录因子启动子串联,在表达载体中得到表达Gal4转录因子...
具体操作步骤如下: 1. 构建酵母双杂交载体: - 选择一个载体,将一种转录激活因子的 DNA 序列插入该载体中的启动子和报告基因 之间,构建转录激活因子的融合蛋白。 - 在另一个载体上将另一种转录激活因子的 DNA 序列插入该载体中的启动子和报告基 因之间。 酵母双杂交技术原理和步骤 酵母双杂交技术原理和步骤 以...
首先,我们来谈谈酵母双杂交技术的原理。该技术主要依赖于酵母细胞中的转录激活因子,这些因子在特定条件下能够激活报告基因的表达。在酵母双杂交实验中,我们将需要检测相互作用的两个蛋白质分别与两个互补的转录激活因子结合。当这两个蛋白质相互作用时,它们会拉近转录激活因子的距离,从而激活报告基因...
具体实验步骤如下:1.构建酵母表达载体:将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合,在表达载体中得到融合基因。2.构建Gal4转录因子启动子激活报告基因的表达载体:将报告基因与Gal4转录因子启动子串联,在表达载体中得到表达Gal4转录因子...