总体来说,酵母双杂交实验通过利用转录因子可拆分性的原理来检测蛋白质的相互作用。 方法: 1、构建酵母双杂交核系统载体AD-TET8、BD-P8:利用同源重组方法将载体AD和BD选择合适酶切位点并设计带有相应酶切位点的引物→扩增目的基因AD-TET8、BD-P2N,回收并与已酶切的载体进行连接,转化至大肠杆菌感受态,37 ℃生长...
目前酵母双杂交实验采用的系统有 LexA 系统和 Gal4 系统两种。在 LexA 系统中,DNA 结合结构域由一个完整的原核蛋白 LexA 构成,转录激活结构域则由一个 88 个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽 B42 构成,它在酵母中可以活化基因的转录;在 Gal4 系统中,BD 和 AD 分别由 Gal4 蛋白上两个不同的结构域(1-147aa 与...