诱导表达LacZ基因把大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子GAL1的穿梭表达质粒pYESZ中,并把得到的重组质粒分别转化到两种不同遗传性状的宿主菌中,其中一株菌为蛋白酶活性缺失90%以上的pep4-3突变菌株.通过比较两株重组菌产生的β-半乳糖苷酶活性水平发现在所述实验条件下,蛋白酶缺失突变菌株...
在半乳糖的诱导下,酵母Gal4结合在半乳糖代谢酶系GAL基因启动子的上游激活序列(Upstream activating sequence,UAS)上,调控Galactokinase(Gal 1),Galactose permease(Gal2),Galactose 1-phosphate uridyltransferase(Gal7),Galactose mutarotase and UDP-galactose 4-epimerase(Gal10)等基因的转录。 酵母单杂交与酵母双杂交...
半乳糖诱导(GAL)系统包括GAL启动子及其调控网络,是酿酒酵母中应用最广泛的诱导系统。GAL启动子需要被转录激活因子GAL4激活,而GAL4的表达和活性受到GAL80和Snf1信号通路的调节。GAL系统的调控相当严格,在葡萄糖的存在下受到强烈抑制,而在半乳糖的存在下,它们的激活强度大大增加。为了不在发酵中不断补加半乳糖,一般都会...
1%-3%。在诱导表达全过程中，以流加方式持续加入半乳糖，培养基中半乳糖浓度为1-3％，保持在发酵罐中，因此酿酒酵母半乳糖诱导浓度为1%-3%发酵罐，指工业上用来进行微生物发酵的装置。
酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验 培养基: sc尿嘧啶缺陷培养基(2%glucose)sc诱导培养基(2%半乳糖) 储藏液: 20%葡萄糖(w/v)20%半乳糖(w/v)贮存液过滤除菌,4℃保存。 sc培养基高温高压杀菌,等待培养基温度减少至60℃以下后,重新加入适当体积的葡萄糖或者半乳糖,搅匀,4℃留存水泵。 实验流程: 1....
2天。用BY4741转化pESCLeu载体做表达，在SD缺Leu的培养基上筛选，2天后能够看到大量很明显的转化子（用加水的BY4741感受态做对照不长）。但是用半乳糖诱导，破菌后SDSPAGE跑上清沉淀，看不到目的蛋白，空载体和质粒跑得SDSPAGE差不多结果。在酵母细胞中信息素信号通路和细胞壁完整性通路是两条重要的...
酿酒酵母表达系统-半乳糖诱导外源蛋白表达实验 培养基: SC尿嘧啶缺陷培养基(2%GLucose) SC诱导培养基(2%半乳糖) 贮存液: 20%葡萄糖(W/V) 20%半乳糖(W/V) 贮存液过滤除菌,4℃保存。 SC培养基高温高压灭菌,待培养基温度降低至60℃以下后,加入相应体积的葡萄糖或者半乳糖,混匀,4℃保存备用。 实验流程: 1....
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半乳糖可诱导表达系统特性的研究,酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)半乳糖可诱导表达系统特性的研究表达,系统,酵母,酿酒酵母,特性的研究,半 乳糖,表达系统,特性研究,低聚半乳糖,半乳糖血症,表达,系统,酵母,酿酒酵母,特性的研究,半,乳糖,表达系统,特性研究,低聚半乳糖 ...
( 山东 大学 生命 科学学院微 生 物技术 国家 重 点实 验室济南2 5 0 1 0 0 )摘要 把大 肠杆菌 p 一 半乳糖 昔酶基因克隆到带有 酵母 半 乳糖 可诱导启动子C A IL 的 穿梭 表达 质粒Y PE S Z中,并把得到的重 组质粒分别 转化到两种不 同遗 传性 状 的宿 主菌中,其 中一 株菌为 蛋白...
当细胞中有半乳糖时,半乳糖就与结合在UAS上的GAL4/GAL80复合物结合,而启动下游的参与半乳糖分解代谢有关酶的转录。如果酵母细胞这个突变株的GAL4蛋白其N端缺失了70个氨基酸序列,也就意味着它丧失了负责与UAS结合的位点,在这种情况下,参与半乳糖分解代谢酶将不会在被半乳糖诱导。