邻近标记(pl)方法 邻近标记技术(Proximity Labeling, PL)是一种用于研究蛋白质相互作用的方法。它克服了传统方法的一些缺点,无需构建文库,对于疏水性和低丰度蛋白互作蛋白的鉴定以及弱/瞬时互作蛋白的分析显示出独特的优势。通过与质谱技术联用,PL技术可在时空水平上提供动态的蛋白互作网络,为深入理解各种生命
-基于核酸相互作用的邻近标记 -染色质免疫共沉淀（ChIP）：在活细胞状态下用化学交联剂固定蛋白质-DNA复合物，然后将细胞裂解，超声破碎将染色质打断成一定大小的片段。用针对目标转录因子或其他与染色质结合蛋白的抗体进行免疫沉淀，把与目标蛋白结合的DNA片段沉淀下来，再通过测序等技术分析这些DNA序列，找出与目标蛋白...
该研究开发了一种不依赖于目标RNA亲和捕获的RNA-RNA相互作用邻近标记方法。 在该研究中,作者筛选了一种截短的催化失活的pspCas13b来靶向lncRNA。通过比较插入标签的位置,作者发现将MS2适配器插入到sgRNA环中有效地招募了额外的蛋白效应物...
邻近标记（Proximity Labeling, PL）技术，自2012年左右诞生以来，为蛋白质相互作用研究带来了新的突破。该技术巧妙地利用了能在邻近空间发挥标记功能的酶，如生物素连接酶等，将生物素以共价键形式与目标蛋白结合。经过链霉亲和素磁珠的富集纯化，再通过质谱等技术手段，即可鉴定出相互作用蛋白。在上一期中，我们介绍了...
图4. 邻近标记中生物素浓度与处理时间的优化 (A) 使用不同浓度的生物素溶液分别对野生型和转TurboID-EYFP拟南芥处理1小时, 使用SA-HRP和anti-GFP抗体进行免疫印迹检测, 分析TurboID-EYFP的活性与表达水平; (B) 用50 µmol∙L-1生物素溶液处理野生型和转TurboID-EYFP拟南芥不同时间, 然后抽提蛋白并进行免疫...
近日,大连化物所精细化工研究室蛋白质折叠与聚集研究组(212组)刘宇研究员和生物技术研究部生物分子高效分离与表征研究组(1810组)张丽华研究员团队合作,通过对有机小分子光敏催化剂进行筛选和结构优化,实现了活细胞内聚集态蛋白质组的靶向光敏邻近...
基于过氧化物酶的邻近标记原理 二、APEX技术的步骤 1. 构建融合蛋白及细胞转染:将过氧化物酶基因(APEX)与目标蛋白基因进行融合,构建相应的表达载体,将构建好的融合蛋白表达载体转染至合适的细胞中,使融合蛋白在细胞内表达。 2. 添加底物和过氧化氢:向细胞中添加生物素 - 酚等底物和过氧化氢,启动邻近标记反应。一...
将6日龄转TurboID-EYFP-ATG8a拟南芥幼苗转移至含1 µmol∙L-1Conc A的MS缺氮液体培养基(MS-N)处理8小时, 在激光共聚焦荧光显微镜下观察亚细胞定位。Bars=50 μm Figure 2.Subcellular localization of TurboID-EYFP-ATG8a in stableArabidopsislines ...
等完成了实验,看到那些标记好的植物蛋白,就像看到自己努力后的成果,那种满足感可别提啦!这就是科学的魅力呀,能让我们不断探索、不断发现新的东西。 总之呢,基于turboid的植物蛋白邻近标记实验方法虽然有点复杂,但只要我们认真对待,细心操作,就一定能从中收获许多。让我们一起加油,去揭开植物蛋白的神秘面纱吧!相信我们...