[题目]RT-PCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术.具体过程如图所示:(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液.原料. . 和引物A等.(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95 ℃.其目的是 . .(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增.理论
PCR技术通过对目的基因进行扩增,可以得到大量的目的基因。对该技术的叙述,不正确的是 A. 遵循的基本原理是双链DNA复制 B. 每扩增一次,温度发生90~95℃→70~75℃→55~60℃的变化 C. 扩增仪内必须加入引物、原料和DNA聚合酶 D. 成指数形式扩增,约为2n,n为扩增循环的次数 ...
👉通常一次PCR反应进行30-35个循环,2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍3️⃣PCR实验原理图?4️⃣实验前,需要提前准备什么?DNA聚合酶一般分为普通的Taq聚合酶和高保真性聚合酶若只是判断PCR产物是否存在特异性序列,选普通Taq聚合酶;若想要得到没有任何突变的PCR产物,需选择高保真聚合酶(以上是一般...
试题分析:(1)PCR技术扩增目的基因的原理为DNA双链复制. (2)由于PCR技术利用的是DNA双链复制的原理,因此用该双链cDNA进行PCR扩增,进行了30个循环后,理论上可以产生约为230个DNA分子;又由于该基因库是由青蒿某个时期mRNA反转录产生的双链cDNA片段,因此只包含某种生物的部分基因,因此该双链与载体连接后储存在一个...
PCR过程为:变性,当温度上升到90 ℃以上时,氢键断裂,双链DNA解旋为单链。复性,当温度降低到50℃左右是,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。延伸,温度上升到72 ℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸,在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
在进行DNA亲子鉴定时,需大量的DNA。PCR技术 (聚合酶链式反应)可以使样品DNA扩增,获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如下图,图中黑色长方形是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百倍甚至几十亿倍,使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。(1)图中的变性...
PCR技术不仅可以扩增目的基因,还可用于定点诱变目的基因等。大引物PCR就是一种定点突变技术。大引物PCR 需要用到引物进行两次 PCR,其操作步骤为∶ ①根据目的基因序列设计引物,得到两个常规引物,分别为常规上游引物和常规下游引物;②根据突变碱基所处序列位置设计突变上游引物,突变位点位于突变引物序列的中间位置③由突...
1.目的基因的筛选与获取(1)目的基因:主要指①的基因。(2)获取方法——利用PCR获取和扩增目的基因①原理:DNA的半保留复制。②条件a.场所:在②溶液中进行,其中一般要添加 Mg^(2+) 。b.模板:DNA双链。c.原料:4种③d.酶:④e.引物:使DNA聚合酶能够从引物的⑤开始连接脱氧核苷酸。③过程a.变性:当温度超过...
1.目的基因的筛选与获取(1)目的基因:主要指工的基因。(2)获取方法利用PCR获取和扩增目的基因原理DNA的半保留复制场所在2溶液中进行,其中一般要添加Mg2+模板DNA双链条件原料4种③酶4PCR聚合引物使DNA聚合酶能够从引物的⑤酶链开始连接脱氧核苷酸式反应变性当温度上升到⑥℃以上时,双链DNA⑦为单链当温度下降到⑧...
解答解:(1)如果要在短时间内获得较多的目的基因,通常采用PCR技术,第一次升温是使双链解开,即高温解链;降温的目的是使引物和模板链结合,即低温复性;第二次升温是使DNA复制开始进行.. (2)构建基因表达载体时需要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶.