随着定量聚合酶链反应(qPCR)的发展,有时也被称为定量实时聚合酶链反应,这些能力在传统PCR的基础上得到了扩展,提供了更好的检测灵敏度和特异性,重要的是,我们可以对目标序列进行精确的定量。 在本手册中,我们将从qPCR的工作原理、实验要求、数据分析和该技术的应用方面出发,对qPCR技术进行一次全面的解析。 什么是qPCR?
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聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术,是分子诊断的技术之一,此项技术常应用于分子生物学服务,它是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍,大大提高...
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR),又称无细胞克隆技术,是分子诊断的技术之一,此项技术常应用于分子生物学服务,它是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法,该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在数小时内可使几个拷贝的模板序列甚至一个DNA分子扩增107～108倍,大大提高...
LCR的扩增效率与PCR相当,用耐热连接酶做LCR只用两个温度循环,94℃min变性 和65℃复性并连接,循环30次左右。其产物的检测也较方便灵敏。目前该方法主要用 点突变的研究与检测、微生物病原体的检测及定向诱变等,还可用于单堿基遗传病多 态性及单堿基遗传病的产物诊断,微生物的种型鉴定,癌基因的点突变研究等。 6....
随着DNA诊断需求的发展,除了常规PCR之外,又逐渐开发出多种不同目的的特殊PCR技术,像长片段PCR、锚定PCR、嵌套式PCR、多重PCR、多重等位基因PCR、不对称PCR、反向PCR、原位PCR、定量PCR、逆转录PCR(RT - PCR)等。 PCR在诸多领域有着广泛应用,在遗传性疾病的诊断、传染病病原的检测、法医学、考古学以及分子生物学...
一些最广泛使用的是: 定量实时PCR(qPCR) 最有用的发展之一是定量实时PCR或qPCR。顾名思义,qPCR是一种定量技术,可以实时监测扩增过程并在扩增过程中检测PCR产物[2]。 它可以用来确定目标DNA的起始浓度,在许多情况下可以忽略凝胶电泳的需要。这要归功于加入了非特异性的荧光插层染料,如SYBR® Green,它与双链DNA...
一些最广泛使用的是: 定量实时PCR(qPCR) 最有用的发展之一是定量实时PCR或qPCR。顾名思义,qPCR是一种定量技术,可以实时监测扩增过程并在扩增过程中检测PCR产物[2]。 它可以用来确定目标DNA的起始浓度,在许多情况下可以忽略凝胶电泳的需要。这要归功于加入了非特异性的荧光插层染料,如SYBR® Green,它与双链DNA...
在分子生物学、基因工程研究,以及遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到 2、广泛应用。,目的基因,载体,复制子,宿主细胞,扩增,扩增,提取质粒DNA分子,连接,转化,常规的DNA分子克隆扩增法,简单、快速、高效、特异的DNA分子克隆扩增法,ng或pg级的模版,pg级的引物,PCR,电泳分离,回收,高纯度的目的DNA片段,70...
第十五章 聚合酶链式反应 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR) 80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点;能在一个ephendof管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍。 PCR的特点 PCR技术简史 2、...