(2) 阴性对照组 (NC):SH-SY5Y 细胞转染阴性对照质粒。 (3) 过表达组 (PC):SH-SY5Y 细胞转染过表达质粒。 转染 细胞铺板 24 h 后,按照 Lipofectamine 说明书用其进行转染。转染 48 h 后,荧光显微镜下观察其 GFP 的表达情况及统计其转染效率 (对明场及暗场荧光细胞计数,得:转染效率 = 暗场荧光细胞个数 /...
基因过表达实验操作由于在基因过表达实验中有多种条件选择,如试剂和细胞株等,在本实验操作中仅以pEX-1空载体为阴性对照,Lipofectamin2000为转染试剂,293T细胞为实验细胞株,按照上述条件分步阐述过表达质粒转染实验的操作过程。如果用户使用不同的细胞株和转染试剂,可根据不同的目的基因和实验条件进行相应的调整。 1、...
会有那么一点点的转染效率的差别,质粒小的转染效率高一点。 2. 更重要的原因是,过表达质粒插入了目的基因,会竞争细胞内部的营养物质,从而导致荧光蛋白的表达量下降,过表达组荧光就不如对照组。 3. 假如目的基因和荧光蛋白是融合表达,还有一个原因是目的基因影响了荧光蛋白的结构。从而使荧光看起来不是那么亮了。
基因过表达实验操作由于在基因过表达实验中有多种条件选择,如试剂和细胞株等,在本实验操作中仅以pEX-1空载体为阴性对照,Lipofectamin2000为转染试剂,293T细胞为实验细胞株,按照上述条件分步阐述过表达质粒转染实验的操作过程。如果用户使用不同的细胞株和转染试剂,可根据不同的目的基因和实验条件进行相应的调整。 1、...
过表达和低表达一个基因在生物领域发展到今天已经是基操勿⑥皆坐。质粒已经是一个很商品化的东西了,直接下单购买。例如下面这个就是购买的说明书。 购买回来怎么用呢。之前咱们讲了,用lipo3000 操作说明如下 质粒转染细胞汇合率要大一些,谁转谁知道,劲儿太大。
原目的是上面那条接近55的条带,中间的泳道是转染了过表达质粒的样本,左边是空载,右边是空白对照,过表达组在接近40的位置出现了颜色极其黑的一个条带 询问公司怎么构建的过表达质粒没有回复,我猜测应该没有用其他的修饰方法 公司给出的解释是外源性质粒表达的蛋白和内源性蛋白大小有差别,跑的效果好会有两个条带...
1.小干扰在进行转染时,细胞密度40-50%,且有血清无血清都可以进行转染(但是具体还是要看大家选择的转染试剂品牌); 2.质粒在转染时,细胞密度70-80%,学姐用的是Lipo3000,它的要求是先在六孔板里加入2ml完培,再根据相应的质粒ug数用无血清培养基孵育一下lipo和质粒,再加入2ml完培内; ...
本人才开始接触,期待基础知识、注意事项及技能. 相关知识点: 试题来源: 解析 跟一般的片段插进质粒构建一样啊 只是过表达的话扩增出来的片段必须包含该基因完整的CDS序列 然后插入位点要在质粒的promoter后面 序列不能有突变 转染也和别的一样 用Lipo啥的 反馈 收藏 ...
1.感受态细胞的质量，比如超级感受态比普通感受态转化效率高很多；2.质粒浓度及质量，连接产物因为质粒浓度低，纯度低转化效率比纯的质粒低很多；3.转化条件，如热激冷激的温度时间等；4.活化培养的条件，SOC培养基优于LB培养基；5.涂布用的培养基及抗生素浓度等。
质粒过表达转进去效率能维持48h。做最长的大概是转染后48h传代24后收蛋白72h都很少一般48h，根据经验不超过7天，维持一定量，要记得质粒是不能在真核复制的而且还会降解随着细胞分别质粒会慢慢消解。