siRNA 是分子中的一种短 (21-23 bp) 双链 RNA 核苷酸，在细胞中发挥各种生物系统的功能。siRNA转染 是利用小干扰RNA（siRNA）来靶向并沉默特定基因的一种技术，广泛应用于基因功能研究和疾病防治等领域。这项技术涉及将siRNA导入细胞中，从而通过RNA干扰（RNAi）机制降低靶基因的表达。为了成功优化 siRNA 转染，需要...
1)储存液准备:siRNA使用前瞬时离心,用RNase-free H2O或灭菌ddH2O配制成20μM/L储存液,分装保存,避免反复冻融(建议不超过5次)。 2)细胞接种: 贴壁细胞:转染前24小时接种0.5 - 2×105个细胞,转染时细胞融合度为30 - 50%。(铺板时要将细胞消化完全混匀,避免细胞堆积生长) 悬浮细胞:转染前24小时接种0.5 - 2...
siRNA是分子中的一种短 (21-23 bp)双链RNA 核苷酸,在细胞中发挥各种生物系统的功能。 siRNA转染是利用小干扰RNA(siRNA)来靶向并沉默特定基因的一种技术,广泛应用于基因功能研究和疾病防治等领域。这项技术涉及将siRNA导入细胞中,从而通过RNA干扰(RNAi)机制降低靶基因的表达。 为了成功优化 siRNA 转染,需要合适的转...
二、siRNA转染 (1)Lipo8000™转染 Lipo8000™试剂是一种简便高效的转染试剂,适用于质粒、siRNA及其他DNA复合物的转染,同时,Lipo8000™试剂具有较小的细胞毒性,转染后全程一般无需换液,24-48h后可直接收集细胞进行Wb或RT-PCR验证。 转染步骤: 1.转染前一天铺细胞,保证第二天转染前细胞密度可达70-80%。 2...
第一次进行siRNA转染,结果显示敲低效率高达80%以上,通过WB验证,发现其中两条siRNA的干扰效率约为50%,整体效果令人满意。📚 在百度上浏览了一圈,发现对于难以转染的巨噬细胞,部分转染试剂的敲低效果不理想,或者RT-PCR结果好但WB结果阴性。最终选择了国产多纳的RNAi转染试剂,意外地在Raw264.7细胞上一次转染就成功了...
体内siRNA于siRNA转染技术 应用是基于纳米颗粒、聚合物或 脂质体的一种技术。科学家们发现 siRNA 在大规模沉默基因表达和研究基因功能方面比较有价值。此类实验的成功通常取决于 siRNA的转染方法。可以使用优化的 转染试剂 和试剂盒在体外和体内转染 siRNA。影响siRNA 转染效率的因素主要包括培养细胞的生长状况、转染发生...
首先,你买回来的siRNA通常是冻干粉末,每管有2.5nmol。你需要加125ul的双蒸水(ddH2O)来配置成20uM的储备液。这个步骤很简单,但一定要小心,别让粉末弄到手上哦!配置好的储备液可以放在-20℃保存,方便以后使用。 细胞种板 🧪 接下来就是细胞种板了。一般来说,24孔板每孔种1*10^5个细胞,用400ul的无双抗...
阳离子聚合物转染试剂：如聚乙烯亚胺（PEI），能够有效地压缩 siRNA 并促进其细胞内摄取。其转染效率较高，且细胞毒性相对较低。然而，PEI 的分子量和电荷密度等因素会影响其转染性能，需要进行优化选择。病毒载体转染试剂：如腺病毒、慢病毒等，能够高效地将 siRNA 导入细胞，并且可以实现长期稳定的基因沉默。但病毒...
因此，深入探讨 siRNA 转染至细胞的可行方法具有重要的科学意义和实际应用价值。二、siRNA 转染的物理方法 （一）电穿孔法 原理：电穿孔法是利用短暂的高压电脉冲在细胞膜上形成瞬时的小孔，使 siRNA 能够通过这些小孔进入细胞内。电脉冲的强度、持续时间以及细胞的类型和状态等因素都会影响转染效率。操作步骤 细胞准备...
简化转染方案 传统上,siRNA 转染是一个为期两天的程序,使优化过程相对缓慢。研究人员开发了 siPORT NeoFX 转染试剂以优化 siRNA 转染方案。siPORT NeoFX 脂质体制剂可用于在胰蛋白酶处理后立即高效转染贴壁细胞,不会增加细胞毒性。只需向稀释的 siRNA 中加入 siPORT NeoFX,孵育后形成转染复合物,向培养...