升高反转录过程中的温度,有助于高GC或复杂二级结构RNA模板的变性,实现全长cDNA的合成。 5)保真性:RNA反转录为cDNA过程中的序列精确度。由于逆转录酶不具备3’-5’外切酶活性,因此没有校正功能,所以合成的cDNA出错率较高。通常,除测序对精准度要求较高外,其他情况下,反转录中引入的错误数量可忽略不计,因为cDNA中...
cDNA 的质量不好判断,因为 cDNA 产物是 smear,所以只能根据 smear 的分布范围大概估计 cDNA 的质量,分布范围越大越好。但是,电泳能看到的 smear 还和加样量相关,所以即使没有看到分布很广的 cDNA 一链,也并不等于它不存在(淡定如斯)。 二号学霸 三号学霸 用PCR 检测合成的 cDNA 中管家基因的量,如果出现比较...
百度试题 结果1 题目mRNA转录合成cDNA的酶是 A. 某些蛋白质的结构基因 B. 所有结构基因 C. 不表达的调控区 D. 内含子和调节区 E. 外显子和调节区 相关知识点: 试题来源: 解析 C
一、逆转录PCR的原理(reverse transcription PCR,RT-PCR) 提取组织细胞总RNA,以其中的mRNA为模板,采用特异性引物、olig-dT或随机引物,在逆转录酶(reverse transcriptase)的作用下反转录成cDNA。再以cDNA作为模板,通过特异性引物,PCR扩增目的基因。 以mRNA为模板合成cDNA的过程,称为逆转录或反转录,所有合成cDNA第一链...
在PCR合成cDNA的过程中，引物的选择对于获得准确且特异的产物至关重要。首先，当特定mRNA由于含有终止反转录酶的序列而难以完整复制时，可以使用随机六聚体引物。这种非特异性的引物能使所有RNA分子作为cDNA第一链模板，PCR扩增过程中会赋予所需的特异性。然而，用随机六聚体合成的cDNA中，大约96%来源于...
图1.逆转录合成cDNA的原理图 用途1.从RNA水平对基因的表达进行检测或定量; 2.5'和3' RACE,克隆全长基因。 实验材料 1.耗材 离心管(规格:0.5ml)、Tip(规格:0.2ml)。 要求无RNase和DNase污染。 处理方法一般来说,未开封的进口离心管或Tip均无RNase和DNase污染。但为了慎重起见,需要重新处理。处理程序如下:洗涤...
1、 随机六聚体引物：当特定mRNA由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝全长mRNA。用此种方法时，体系中所有RNA分子全部充当了cDNA第一链模板，PCR引物在扩增过程中赋予所需要的特异性。通常用此 引物合成 的cDNA中96%来源于rRNA。2、 Oligo(dT)：是...
oligo （ dT ）结合在 mRNA 的 3' 端，因此合成全长的 cDNA 需要反转录酶从 mRNA 分子的一端移动到另一端，有时这种全合成难以达到，尤其是 mRNA 链很长时，为此建立了一种随机引物法合成 cDNA 。随机引物是一种长度为 6~10 个核苷酸，由 4 种碱基随机组成的 DNA 片段。与 oligo （ dT ）...
(A)尾巴结合。(2)碱水解法除去 mRNA模板之后,单链 cDNA能够自我折叠形成发夹 环结构,折叠的短链即成为第二条 cDNA链合成的引物,反转录酶或Klenow酶就可催化第 二条链cDNA合成。(3)采用SI核酸酶消化法,除去单链区的发夹环结构,就可将获得完 整的DNA分子。⏺反馈...