由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下,在底物X-Gal存在时产生蓝色菌落,因而易于识别。然而,当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段,使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,又称为蓝白斑筛选。如用蓝白斑筛选则经连接产物转化的钙化菌平板37℃温...
1．目的 学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。2．原理 利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。3．器材 旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（...
Richter同源克隆鉴定是基于B淋巴细胞群Ig基因重排具有独立且唯一的生物学特性,利用免疫组库技术对患者不同组织来源的样本进行多重PCR扩增建库,通过高通量测序获取样本BCR(B Cell Receptor) 克隆CDR3序列信息,所获得的白血病样本和淋巴瘤样本的免疫球蛋白重链IGH及...
5. 转化子的形成:受体菌染色体组进行复制,杂合区段亦半保留复制,当细胞分裂后,此染色体发生分离,于是新形成一个转化子。 ★扩展: 同源重组:同源重组也称为一般性重组(general recombination),它是一种在两个DNA分子的同源序列之间直接进行交换的重组形式。同源重组不依赖于序列的特异性,只依赖于序列的同源性。进行...
TransDB3.1化学转化克隆感受态细胞 目录号规格单价 CD531-0110×100 µl460 产品详情介绍 TransDB3.1化学感受态细胞经特殊工艺制作,可用于DNA的化学转化。该细胞含有gyrA462基因,对ccdB基因产物的毒性具有抵抗作用,适用于转化和扩增包含ccdB基因的质粒载体。使用 pUC19 质粒DNA检测,转化效率高达108cfu/μg DNA以上。
原因很多：1.培养基的问题。用确定可以长起来得菌测试一下，可以很快知道是否有问题。2.确认抗性是否正确。3.最可能的问题是连接转化失败，这个问题也最难解决，涉及的小问题更多。先确认试验设计没有问题，再确认酶切是否有问题，然后再确认连接过程是否符合规定。4.如果确认上述问题都没有，那就是另一...
单克隆细胞是指通过单细胞克隆技术获得的细胞系,具有单一的遗传背景,可以稳定地传代和增殖。 二、质粒转化单克隆的方法 1.准备细胞和质粒 在进行质粒转化单克隆之前,需要准备好单克隆细胞和质粒。单克隆细胞可以通过单细胞克隆技术获得,而质粒则需要通过基因工程技术进行构建和修饰。 2.细胞培养和转导 将单克隆细胞...
质粒转化单克隆的方法和步骤通常包括以下几个基本步骤:质粒制备、细胞培养、细胞感受态制备、转化、筛选和鉴定。 1.质粒制备:首先需要提取目标质粒,通常利用大肠杆菌等细菌进行质粒的扩增和纯化。在质粒制备的过程中,需要对质粒进行酶切和连接等操作,以满足后续实验的需要。 2.细胞培养:将目标细胞进行培养,通常采用常见...
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克隆与转化 地址:北京海淀区永定路88号长银大厦9C05 电话:86-010-58895880 86-010-58896088 克隆概述 传统的克隆实验包括以下几种操作:将DNA 片段插入到质粒中,以修饰或引入抗性基因、启动子和信号序列或开放阅读框等,用于基因表达或下游蛋白表达研究。在开始克隆实验之前定出克隆策略是很重要的。需要考虑的问题有:...