无化学趋化物培养基:RPMI 1640 supplemented with 10% FCS 操作步骤: ① 凝胶凝胶化后,用不含化学趋化物或含化学趋化物的培养基加入细胞趋化载玻片的储液池中。 ②用65µl含有化学趋化物的培养基填充一个储液池,用65μl无化学趋化物培养基填充另一个储物池作为细胞趋化实验(+/-)。 ③ 作为对照实
1.4 Matrigel侵袭实验：刺激后的各组细胞用PBS漂洗3次。用无血清培养基制备单细胞悬液，5×105个细胞/ml，每组细胞分为两部分。胎盘兰拒染实验，细胞活力需大于95%。Transwell培养板上室加入100μl细胞悬液(5×104个)，并加入无血清培养基200μl。Transwell培养板下室加入500μl趋化因子，37℃，5%...
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的神经氨酸酶呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人单核细胞趋化蛋白的含量。 二、人单核细胞趋化蛋白1ELISA试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6...
无化学趋化物培养基:RPMI 1640 supplemented with 10% FCS 操作步骤: ① 凝胶凝胶化后,用不含化学趋化物或含化学趋化物的培养基加入细胞趋化载玻片的储液池中。 ②用65µl含有化学趋化物的培养基填充一个储液池,用65μl无化学趋化物培养基填充另一个储物池作为细胞趋化实验(+/-)。 ③ 作为对照实验(-/-...
重复实验两次。注意2. 1 NIH3T3 细胞制备的趋化因子与胎牛血清 趋化因子是能使细胞产生趋化运动的一类细胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 细胞制备趋化因子做细胞体外侵袭实验的实验室比较多,时间较长且实验步骤繁琐。众所周知,胎牛血清中有趋化因子,我们在不同浓度TNFα刺激下的HCCC29810 胆囊癌细胞体外侵袭能力的...
1 材料与方法 1. 1 Matrigel：Becton Dickinson Compary, - 20 ℃保存；Tanswell plate：Costar ,USA , # 3422 ,聚碳酯膜微孔直径为8μm；苏木素染液，梯度乙醇，二甲苯溶液。1. 2 趋化因子的制备 取传代第二天长势良好的NIH3T3细胞,无血清培养基轻柔漂洗两次; 加入无血清培养基,37℃,5 %...
操作步骤: ① 凝胶凝胶化后,用不含化学趋化物或含化学趋化物的培养基加入细胞趋化载玻片的储液池中。 ②用65µl含有化学趋化物的培养基填充一个储液池,用65μl无化学趋化物培养基填充另一个储物池作为细胞趋化实验(+/-)。 ③ 作为对照实验(-/-),用65µl无化学趋化物培养基填充两个储液池。