质粒过表达转进去效率能维持48h。做最长的大概是转染后48h传代24后收蛋白72h都很少一般48h，根据经验不超过7天，维持一定量，要记得质粒是不能在真核复制的而且还会降解随着细胞分别质粒会慢慢消解。
1.感受态细胞的质量，比如超级感受态比普通感受态转化效率高很多；2.质粒浓度及质量，连接产物因为质粒浓度低，纯度低转化效率比纯的质粒低很多；3.转化条件，如热激冷激的温度时间等；4.活化培养的条件，SOC培养基优于LB培养基；5.涂布用的培养基及抗生素浓度等。
1. 转染效率低,复孔重复性差问题:转染效率低,复孔重复不出来怎么办?解答:首先要确保细胞状态良好,选择处于分裂期的细胞进行转染。阳性对照可以选择过表达的荧光蛋白质粒。DNA质量尤为重要,建议先进行酶切验证。实验结果很灵敏,有一定差异是正常的,通常只要确保在一个数量级之内即可。如果差异超出这个范围,可以从以下...