为了提高转化效率,实验中要考虑以下几个重要因素: (1)细胞生长状态和密度不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌,最好使用从单克隆菌落制备的新鲜菌液,细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好,可通过监测培养液的 OD600来控制。DH5α 菌株的OD600为0.5时,细胞密度在5×10⁷个/mL 左右(不同的菌株 情况有所不同...
操作步骤:质粒 DNA 的转染: 对大多数细胞来说,DNA(µg)与 NG2000 (µl)的比例为 1:2~1:3.转染时高 的细胞密度可以得到高的转染效率 和表达水平,并能减少细胞毒性. 1. 以 24 孔板为例 贴壁细胞: 转染前一天,用 500 µl 不含抗生素的培养基接种 0.5-2×105 细胞,使之第二天能达到 70-90% ...
根据外源性基因在真核细胞中表达时间的长短我们可将转染技术可分为瞬时转染和稳定转染(永久转染)两种。在瞬时转染的细胞中，外源基因得以表达但它们并不会整合到细胞的基因组中，也就不会被复制，适用的核酸类型主要包括质粒DNA、siRNA、miRNA和mRNA。细胞瞬时转染的外源基因表达时间有限，通常仅持续几天，直到外源基因...
如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或 2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。 1. 培...
博凌科为复苏后的细胞并不生长分裂,可能是培养条件不够合适。。。不分裂的细胞内部生命活动不太活跃,在进行病毒或质粒转染,应该也不会有多大的克隆扩增吧。。。这样对于后面所要进行的筛选或鉴定是不利的~~ 分析总结。 细胞复苏后实验的问题如果细胞复苏出来后没有传代见形态状态密度都良好直接用来做病毒感染或质粒...
答案解析 查看更多优质解析 解答一 举报 博凌科为复苏后的细胞并不生长分裂,可能是培养条件不够合适。。。不分裂的细胞内部生命活动不太活跃,在进行病毒或质粒转染,应该也不会有多大的克隆扩增吧。。。这样对于后面所要进行的筛选或鉴定是不利的~~ 解析看不懂?免费查看同类题视频解析查看解答 ...
在图1 中,我们观察到当转染时的细胞密度从 1 增加到 2 x 106cell/mL时,质粒 DNA 可用性在维持 VG 滴度方面起着重要作用。在低细胞密度瞬时转染中,质粒 DNA 通常以体积为基础进行递送。与我们的研究一样。Grieger、Soltys 和 Samulski 也观察到当细胞密度和质粒浓度加倍时,生产过程中的滴度增加。对于 4 x ...