质粒是一种能被转入细胞并表达蛋白质的“工具”。它由载体和目的片段组成。🌈 质粒的基本元件 ori:质粒复制起始位点 enhancer:增强子 promoter:启动子 抗性基因 酶切位点 MCS:多克隆位点🛠️ 质粒构建的步骤 1️⃣ 选择合适的质粒载体:根据实验目的选择合适的质粒载体。 2️⃣ 准备目的片段:获取目的片段...
严紧型质粒:当细菌染色体复制一次时,质粒也复制一次,每个细菌内只含1～2个质粒; 松弛型质粒:当细菌染色体复制停止后仍然能继续复制,每一个细菌内一般含20个左右质粒拷贝。这些质粒的复制是在寄主的松弛控制之下的,每个细菌中含有10-200份拷贝,如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白...
质粒构建是分子生物学研究中最常用的实验技术，原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达，可以看到我们最最需要的三样元素：目的片段、酶切载体和连接酶。质粒构建方式多样，常规...
质粒构建简化过程(以酶切连接为例):提取质粒——扩增目的基因片段——对质粒和目的片段进行酶切处理——连接——转化——培养——鉴定几个步骤。 质粒构建是分子生物学研究中最常用的实验技术,原理依赖于限制性核酸内切酶,DNA连接酶和其他修饰酶的作用,分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后,将二者连接在一起...
质粒构建实验的目的是将目标基因插入质粒载体中,以便在宿主细胞中表达。以下是简化的质粒构建步骤,助你轻松完成实验:🧬 1. 载体选择与设计 选择适合实验目的的质粒载体,确保载体包含启动子、抗性标记、多克隆位点等必要元件。例如,pUC19载体适用于大多数克隆实验。🔍...
质粒构建是分子生物学中的一项关键技术,它涉及到将特定基因插入质粒载体中,用于基因克隆、表达或其他实验目的。本期我们将详细讲解质粒构建的每个步骤和关键点。 PCR扩增:获取目标片段 🧬 首先,我们需要通过PCR扩增来获取目标片段。PCR(聚合酶链式反应)是一种常用的分子生物学技术,能够将从模板中扩增出目标DNA片段。
构建 ▐带有 GFP 标记的 Parkin 过表达质粒 质粒的构建可经公司购买得到，一般同时提供阴性对照菌液及质粒。利用限制性内切酶消化获得线性化载体，PCR 扩增制备 Parkin 基因片段，所用扩增引物需在其 5' 端添加同源重组序列，使用该引物扩增基因片段，扩增产物 5' 和 3' 最末端的序列分别与线性化载体两末端序列...
构建 ▐带有 GFP 标记的 Parkin 过表达质粒 质粒的构建可经公司购买得到,一般同时提供阴性对照菌液及质粒。 利用限制性内切酶消化获得线性化载体,PCR 扩增制备Parkin基因片段,所用扩增引物需在其 5' 端添加同源重组序列,使用该引物扩增基因片段,扩增产物 5' 和 3' 最末端的序列分别与线性化载体两末端序列完全一致...
Gateway Recombination Cloning 质粒构建流程 (thermofisher) Gibson Assembly Gibson Assembly质粒构建流程 (NEW ENGLAND BioLabs) 感受态 用于质粒的扩增的大肠杆菌菌株 大肠杆菌是天然存在于动物肠道中的革兰氏阴性杆状细菌。存在多种天然的大肠杆菌菌株,其中一些对人类致命。常见的商业化大肠杆菌菌株大多数都来自两个单独的...