柱提取质粒后,未经酶切的正常状态的应该有3个条带,分别是共价闭合超螺旋DNA、开环DNA和线状DNA,有时候会出现极淡的二聚体超螺旋带. 双酶切质粒后,要看你质粒上有几个酶切位点来决定酶切后的带型.但是你要首先保证你的质粒是被完全酶切的.如果你能保证完全酶切,那么条带数应等于你的酶切位点数. 分析...
我的意思是,要不要去掉开环线性DNA?...说实话，线性开环的真不多，就算有转化后也不会起作用。
一般都不用切胶回收的，直接做酶切就可以了哦，开环的那部分对实验没有影响的。
答案: 用琼脂糖凝胶电泳位点分离制备质粒,分出三条带。判断开环DNA,线性DNA,闭环DNA的实验设计如下: (1)从电泳凝胶中会回收三种DNA分子。 (2)先把三种DNA分子通过碱变性和复性,而要把它们转化宿主菌。 (3)在可以选择平板上长肉骨粉菌落的为闭环DNA,其他的为开环DNA和线性的DNA分子。 (4)用限制性内切酶切开...
2)用适当的限制性内切酶(常为4碱基识别位点)进行部分酶切或超声波打断基因组DNA; 3)在琼脂凝胶电泳上或蔗糖梯度离心筛选适当长度的DNA片断(根据载体的要求); 4)载体的酶切、回收; 5)将处理好的基因组DNA片断与载体连接; 6)将重组子导入宿主细胞 7)文库的鉴定、收集、保存; ...
柱提取质粒后,未经酶切的正常状态的应该有3个条带,分别是共价闭合超螺旋DNA、开环DNA和线状DNA,有时候会出现极淡的二聚体超螺旋带.双酶切质粒后,要看你质粒上有几个酶切位点来决定酶切后的带型.但是你要首先保证你的质粒是被完全酶切的.如果你能保证完全酶切,那么条带数应等于你的酶切位点数.结果...
我觉得不需要，可以直接酶切。
我们都是直接提了质粒之后直接做酶切，不需要去除线性的
大家都是直接酶切啊，没听说还要跑个电泳回收的。