我们从 623 个 逆转录变体酶库中筛选出了 31 个结合结构域改造的逆转录酶,再进行表达和属性分析,进一步筛选,最终确定了 7 个 强一链活性变体酶进行组装,成功研发出 第六代 RNA 建库试剂 —— Vazyme #NR606 在整个文库构建的流程中,涉及了片段化、一链合成、二链合成、接头连接、文库扩增等一系列反应步骤,...
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随后,通过引入dUTP合成二链,再通过UDG酶进行特异性消化等步骤实现链特异性建库。 然而,放线菌素D具有一定的毒性,且需避光储存。为此,Vazyme经过筛选、改造及分析评测,最终获得具有更高RNA依赖性的DNA聚合酶活性的变体酶。该特性使得逆转录过程中,酶更易与RNA模板结合,从而替代放线菌素D功能,实现优良的链特异性。