首先是WB蛋白图的组图。组图,我们都是用Adobe illustrator(安装包点击下载,这里不再赘述,这是标准的处理图的方式)。 我们打开AI软件,新建画板后将图片导入: 随后用矩形工具将想要的地方圈上: 然后要将这个矩形要设置成空心的: 再将矩形和原始图片都选中,并在原始图片上右键选择建立剪切蒙板: ...
经验：上图展示的是一点信号都没有，如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，ECL发光液失效。另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一张白片。02.高背景 原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够；解决办法：降低一抗浓度，增...
Western Blot，也就是我们通常所说的“WB”，中文名称是“蛋白印迹”或“免疫印迹”，其核心本质是抗原抗体的特异性反应。是一种被广泛应用并得到公认的技术，用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。这一技术利用抗体与特定待检测蛋白的结合，测定生物样本中的蛋白水平。抗体与其靶点蛋白表位的精确结合可用于检测蛋...
膜一般有PVDF膜或NC膜,跑大分子蛋白选择PVDF膜。PVDF膜不需要在转移buffer中添加甲醇,目的蛋白转印的机会更高。 增加转印时间 ⏳ 在正确的选择完凝胶、转印膜及转移buffer后,转印正式开始。半干转快且方便,但不适用于大分子蛋白。推荐使用湿转,因为大分子蛋白转移时间很慢,推荐350-400 mA转移90min或4°C,40 mA...
Western blot(西方实验):蛋白质免疫印迹试验。 Southern blot(南方实验):检测DNA。 Northern blot(北方实验):检测RNA。 easternn blot(东方实验):用于检测蛋白质的翻译后修饰以及脂质和碳水化合物等成分的存在。 01 WB Western blot,就是WB,蛋白质免疫印迹试...
首先是WB条带图,我们可以看到,有些论文里面western blot(WB)蛋白条带图是倾斜的,如下: 那其实拉直很简单,我们现在所有的SCI插图都是要提交原始图片,都是用Adobe illustrator(AI,点击下载安装包)绘制的。 下面,小编就教大家Adobe illus...
(免疫印迹实验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。用于样品特定蛋白在样品中表达相对表达量进行检测。 1.实验流程 2.实验周期及交付结果形式 1. 12个工作日内 2. 黑白显色图(带Marker)、内参、灰度值分析、柱状图、实验报告 ...
常见的WB条带灰度值归一化方法 1. 内参归一化(最常用):选择一种在细胞中稳定表达的蛋白作为内参(如β-actin、GAPDH等),将目标蛋白的灰度值与内参蛋白的灰度值进行比值计算,得到相对表达量。 2. 总蛋白归一化:使用考马斯亮蓝、丽春红等染料对整个凝胶或膜进行染色,测量总蛋白的灰度值,将目标蛋白的灰度值与总蛋...
如果你研究的蛋白分子量比较大(大于150KD), 苦于一直跑不出好看的western-blot, 那么这篇文章一定适合你! 01 选对凝胶很重要 3种最常见的凝胶包括Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate. Tris-Glycine凝胶的PH为8.6,且保质期很短。在跑胶的过程中,PH还有上升的趋势,可达到9.5。这会导致蛋白降解和低分辨率...
因此，在解析实验结果时，务必明确蛋白样品的种属来源。对于小鼠样本，预期条带应位于36kd附近（可能接近40kd的蛋白marker）；而对于人源样本，目的蛋白则应定在32kd左右（可能距离35kd的蛋白marker稍远）。0利用过表达技术确定蛋白大小 若仅通过检索不同种属的目的蛋白大小仍无法确定其实际大小，别担心，还有另一种...