一种不提蛋白不转膜的 WB:In-Cell Western,顾名思义,是一种在细胞内就可以完成的简单 WB。比传统 WB 简单、快速、便捷。 01、更快、处理更多样本 传统WB 通常需要 7～25 小时,最多一块胶跑 24 个样品,但 In-Cell Western可以在 5～6 小时内完成最多 384 个样品。 02、ICW = WB + ELISA + IF In...
Western Blot，也就是我们通常所说的“WB”，中文名称是“蛋白印迹”或“免疫印迹”，其核心本质是抗原抗体的特异性反应。是一种被广泛应用并得到公认的技术，用于检测细胞或组织提取物中的蛋白表达水平。这一技术利用抗体与特定待检测蛋白的结合，测定生物样本中的蛋白水平。抗体与其靶点蛋白表位的精确结合可用于检测蛋...
Northern blot(北方实验):检测RNA。 easternn blot(东方实验):用于检测蛋白质的翻译后修饰以及脂质和碳水化合物等成分的存在。 01 WB Western blot,就是WB,蛋白质免疫印迹试验,是对目的蛋白进行检测的一种实验方法,大致分为以下7步:蛋白提取、蛋白定量、SDS-...
但是与marker比对后,在蓝色55kD大小的marker平行的曝光条带中并未看到目的蛋白条带,而是在蓝色55kD与40kD之间看到一条较浓的蛋白条带,为了解决这一问题,首先我们应该知道我们是通过蛋白marker来辅助判断目的蛋白条带,所以存在两大关键对象
通常我们用腺病毒或腺相关病毒转染细胞,想过表达该目的蛋白,通常在构建病毒时候会在目的蛋白上融合上一个标签蛋白(常用的标签蛋白分子量小),所以我们除了孵育目的蛋白,还可以孵育标签蛋白抗体来确定目的蛋白位置,如下图所示。 这样,我们就可以确定我的鼠源细胞目的蛋白在40kd下方(预计36-38kd),而55kd附近的条带为...
如果你研究的蛋白分子量比较大(大于150KD), 苦于一直跑不出好看的western-blot, 那么这篇文章一定适合你! 01选对凝胶很重要 3种最常见的凝胶包括Tris-Glycine,Bis-TrisandTris-Acetate. Tris-Glycine凝胶的PH为8.6,且保质期很短。在跑胶的过程中,PH还有上升的趋势,可达到9.5。这会导致蛋白降解和低分辨率。
在正确的选择完凝胶、转印膜及转移buffer后,转印正式开始。半干转快且方便,但不适用于大分子蛋白。推荐使用湿转,因为大分子蛋白转移时间很慢,推荐350-400 mA转移90min或4°C,40 mA,转印过夜。通过以上五个步骤,你可以更好地跑出漂亮的大分子蛋白WB图!0 0 ...
实验材料蛋白质样品试剂、试剂盒裂解液PBSSDS上样缓冲液电泳缓冲液转移缓冲液丽春红染液TBSTTBS洗脱抗体缓冲液抗体仪器、耗材电泳仪移液器脱色摇床显影仪实验步骤一、实验步骤↓↓↓展开
经验：高背景可能是WB中最常见出现的问题，目的条带单一清晰，但是其他地方有弥漫性较为均一的背景（比较连续的）。其实只要注意操作规范就很容易避免。03.非特异性条带 原因：一抗非特异性与蛋白结合；解决办法：更换一抗；经验：绝大多数是因为一抗不好，无法判断哪一条是目的条带。如果实在没有更好的抗体，...
Western blot免疫印迹(以下简称WB)实验作为检测蛋白表达相对定量的技术,在完成Western blot实验后,得到的是蛋白条带,还需要再对Western blot条带进行结果处理。对于WB结果处理的过程,主要分为3个部分: 1. 用PS软件进行排版; 2. 用image J进行灰度值分析; ...