WB法可用于检测天然和合成来源的蛋白质。来自表达系统的重组蛋白和来自生物样品的内源蛋白都可以用蛋白质印迹法检测。对于要通过WB分析的蛋白质，首先必须要处理含有目标蛋白的样品，以使目标蛋白质可用于分析。例如，在筛选表达时，通过裂解细胞来释放蛋白质，使其进入分离基质。蛋白质提取之后可以进行变性和还原，...
一、WB实验的基本原理：蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。与Southern或Northern杂交方法...
（1）准备：明确所检测目的蛋白的表达情况，有些蛋白可能只在部分细胞或者组织中表达，有些蛋白可能需要刺激才能表达或表达量增加，可通过已发表文献或者在线数据库如Uniport、NCBI和BIOGPS等，了解所研究蛋白的特点，正确选择和处理样本。（2）蛋白提取：蛋白提取是WB实验的开端，裂解液的选择、样本的破碎方法、温度和...
一、实验原理 Western blot（也称为蛋白质免疫印迹）是一种常用于研究中分离和鉴定蛋白质的技术。它利用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE) 来分离指定样品中包含的各种蛋白质，然后将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素或 PVDF 膜上，接下来将膜与对感目标蛋白质的特异抗体一起孵育。在洗膜过程中，未结合的抗体被洗...
免疫印迹，又被称为蛋白质印迹（Western blot，WB），是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术，在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离，随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原，与相应的抗体发生免疫反应，接着与酶标记的第二抗体发生反应。...
WB是一种把电泳分离的组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜),并以针对特定氨基酸序列的特异性试剂作为探针检测。WB采用抗体作为探针,抗体可以与附着在固相支持物的靶蛋白的抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。这种技术的作用是对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析...
WB检测蛋白质磷酸化的原理: 蛋白质免疫印迹法(WB)是定性检测蛋白质磷酸化水平的金标准。通过SDS-PAGE分离蛋白质后,当施加电压时,蛋白质从凝胶转移到膜上(常用PVDF膜、NC膜或尼龙膜)。用能够识别目标蛋白质磷酸化的抗体孵育膜,然后用辣根过氧化物酶 (HRP) 偶联的二抗孵育。当添加HRP底物时,可以检测到抗体结合了...
一、原理 蛋白质免疫印迹法即Western Blot。 它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法,基本原理是经过 PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分离的蛋白质样品,转移到固相载体例如硝酸纤维素薄膜(NC膜)或PVDF膜上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。