ChIP 的一般流程是:甲醛固定细胞---收集细胞,将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA 复合物相互结合---加入Protein A 或 Protein G 微珠,结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA 复合物---解交联,纯化...
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CUT&RUN 是一种使用靶蛋白特异性一抗进行识别,并通过Protein AG - 微球菌核酸酶 (pAG-MNase) 分离释放特异性靶蛋白-DNA 复合体的体内方法【1,2,3】。从细胞到 DNA 只需 1 至 2 天,并且它可以自动化,实现最大通量和可重复性。CUT&RUN 是一种使用靶蛋白特异性一抗进行识别,并通过Protein AG - 微球菌...
在活细胞状态下获得自然状态下蛋白质、DNA结合复合物,通过试剂交联固定蛋白DNA复合物,破碎细胞后获得细胞核DNA片段,利用超声波方法将核DNA随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然后通过免疫学方法磁珠吸附沉淀染色质片段,特异性的富集蛋白结合的DNA片段,通过系列方法洗脱得到DNA片段并纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相...
ChIP 的一般流程是:甲醛固定细胞---收集细胞,将染色质复合物中 DNA 切割---加入目的蛋白的抗体,与靶蛋白-DNA 复合物相互结合---加入Protein A 或 Protein G 微珠,结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物并沉淀---对沉淀下来的复合物进行清洗,除去一些非特异性结合---洗脱,得到富集的靶蛋白-DNA 复合物---解交联,纯化...