RNA pull down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用的主要实验方法之一。使⽤体外转录法标记⽣物素RNA探针，然后与胞浆蛋⽩提取液孵育，形成RNA-蛋⽩质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠结合，从⽽与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 结合蛋⽩是否与RNA 相互...
RIP,全称为RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 结合蛋白免疫沉淀,其主要目的是富集RNA分子和与之相互作用的蛋白质,以便进一步分析这些相互作用的性质和功能。 RIP的基本步骤如下: ① 交联: 首先,将细胞或组织样本进行交联,通常使用交联剂(如甲醛)处理,以稳定RNA和与之相互作用的蛋白质。
这些相互作用是基于特定RNA结构或序列的RNA与RNA结合蛋白之间的短暂接触。事实上今天我们要介绍的文章在2021年就投稿到了bioRxiv上，这篇文章中德国海德堡大学Katharina Höfer和Andres Jäschke团队发现蛋白质和RNA也可以通过共价键紧密结合在一起，这一过程被称为“RNAylation”。2022年有两篇文章相继报道了RNAylatio...
RIP是一种RNA结合蛋白免疫沉淀技术,用于检测RNA结合蛋白与其靶RNA之间相互作用,以蛋白为主角。 RIP的基本原理是用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白,防止非特异性的RNA的结合,免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来,结合的RNA序列通过microarray(RIP-Chip)、定量RT-PCR或高通量测序...
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。 简而言之,RIP是在已知蛋白的情况下,利用目标蛋白的抗体,把蛋白和RNA复合物一起沉淀下来,然后经过分离纯化获得结合在复合物上的RNA,最后通过定量RT-PCR或高通量测序(RIP-Seq)方法来鉴定,这里的RNA可以是mRN...
蛋白质与RNA互作研究新技术:RNA亲和纯化测序, 视频播放量 4、弹幕量 0、点赞数 0、投硬币枚数 0、收藏人数 0、转发人数 0, 视频作者 蓝景科信, 作者简介 专注于转录调控研究,分子互作技术,体外蛋白表达,核酸提取,靶向捕获测序等。联系电话:400-618-7099,相关视频:D
几种RNA和蛋白互作的检测技术 RIP RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术。 简而言之,RIP是在已知蛋白的情况下,利用目标蛋白的抗体,把蛋白和RNA复合物一起沉淀下来,然后经过分离纯化获得结合在复合物上的RNA,最后通过定量RT-PCR或高通量测序(RIP-...
1. RNA与蛋白质的互作方式 RNA与蛋白质之间的互作是基于它们之间的化学结构相互配对的。RNA分子具有多种不同的结构,其中最常见的是单股线性结构和双股线性结构。蛋白质是由氨基酸单元组成的长链,具有三级结构:一级结构是氨基酸序列,二级结构是α-螺旋或β-折叠,三级结构是蛋白质的整体立体构象。RNA与蛋白质之间的互...
RNA pull down是一种流行的以 RNA 为中心研究RNA-蛋白质相互作用的方法。用于分离RNA 结合蛋白复合物的方法可分为两大类:体外和体内纯化策略。迄今为止,大多数已知的RNA-蛋白质相互作用已使用体外RNA 下拉分析确定。RNP 复合物的体外重组采用了各种 RNA 标记策略,例如共价连接、生物素标记或适体,确保目标RNA 固定...
简而言之,就是已知RNA,去获得未知的RNA结合蛋白的过程。 三、CLIP Clip(crosslinking-immunprecipitation)染色质免疫沉淀,是一项体内研究RNA分子与RNA结合蛋白相互作用的革命性技术。其主要原理是基于RNA与其相应的RNA结合蛋白会在紫外照射下会发生共价结合,以RNA结合蛋白的特异性抗体将RNA-蛋白复合物沉淀之后,回收其中的...