当酶的稳定性遭到破坏时就会沉淀析出。常见的沉淀法有盐析法、有机溶剂沉淀法、重金属沉淀法及加热变性沉淀法,其中盐析法多用于酶的分离纯化。 1.1盐析沉淀 盐析沉淀法是根据不同酶在一定浓度盐溶液中溶解度降低程度不同达到彼此分离的方法。酶易溶于水,因为其分子的-COOH、-NH2和-OH都是亲水基团,这些基团与极性...
6.结晶纯化:可以采用醇沉淀、浓缩、结晶等方法对蛋白酶进行纯化。其中,醇沉淀方法是常用的分离纯化方法之一,通过醇的添加,使蛋白酶蛋白质聚集并沉淀下来,然后进行洗涤、溶解等操作,最终得到纯净的木瓜蛋白酶。 7.洗脱:将获得的木瓜蛋白酶溶解于缓冲液中,使其达到所需的适宜酶活性和稳定性。 8.酶活性测定:用适当的...
分离纯化方法[4] 将胰蛋白酶粗品溶解后,经盐溶、盐析,再用活性胰蛋白酶激活,被激活的酶溶液再经结晶透析、冻干的方法,即可得较高纯度的胰蛋白酶,包括如下步骤: (1)投料:称取胰蛋白酶粗品,按每克胰蛋白酶粗品加2～4ml的水搅拌溶解,调节pH至3.0±0.5,以助其溶解,搅拌10～16小时;计量溶液体积,按400～500g...
本发明公开一种木瓜蛋白酶分离纯化方法和其固定化方法,以及所得产品.该分离纯化方法包括如下步骤:(1)将含木瓜蛋白酶的原料溶解,除去不溶物,之后调节蛋白浓度为10mg/ml～20mg/ml,得初始粗酶溶液;(2)将初始粗酶溶液与聚乙二醇,无机盐和水混合,溶解,待各成分混合均匀后分相,其中,初始粗酶溶液的含量为30%～40%,...
1.一种角蛋白酶的分离纯化方法,步骤如下: 将枯草芽孢杆菌BacillussubtilisFJ-3-16发酵培养,获得粗酶液,用质量 分数为40～70%的硫酸铵梯度沉淀粗酶液后,用pH10.0,50mMTris-HCl缓 冲液重悬沉淀、透析;用pH10.0,50mMTris-HCl缓冲液平衡QSepharose fast-flow离子交换柱,上样,酶活峰在穿过峰中;收集有酶活的组分...
1.一种分离纯化胰蛋白酶的方法及提高胰蛋白酶复溶性的药物组合物,其特征在于:将胰蛋白酶粗品溶解后,经盐溶、盐析,再用活性胰蛋白酶激活,被激活的酶溶液再经结晶透析、冻干,即可。 2.根据权利要求1分离纯化胰蛋白酶的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤: (1)投料:取胰蛋白酶粗品,加水溶解,调节pH,搅拌;加...
1.一种从人体血液中性粒细胞的嗜天青颗粒中分离纯化天然蛋白酶3的方法,其特征在于:步骤包括:S1、研磨、溶解:将嗜天青颗粒细胞组织研磨均匀,高速离心去除不溶解杂质获得过柱起始蛋白溶液;S2、阳离子交换层析:将起始蛋白溶液负载于阳离子交换柱层析柱中,使用梯度盐度层析洗脱方式进行洗脱,得到初级纯化蛋白样品;S3、染色配...
一种副短短芽孢杆菌角蛋白酶的分离纯化方法,其特征在于包括如下步骤: 菌种活化:先将菌种在LB固体培养基上活化。种子培养:然后挑取单菌落转入LB液体培养基中,37℃,220rpm培养12h。发酵培养:将种子液按照体积百分比为2%接种到发酵培养基中,于摇床培养37℃培养20h。发酵培养基:角蛋白1%,可溶性淀粉1%,玉米粉1%,NaCl 0....
代理机构代理人(51)Int.CI 权利要求说明书说明书幅图(54)发明名称一种分离纯化胰蛋白酶的方法(57)摘要本发明公开了一种分离纯化胰蛋白酶的方法,技术方案是将胰蛋白酶粗品溶解后,经盐溶、盐析,再用活性胰蛋白酶激活,使其酶原转变为有活性的胰蛋白酶,被激活的酶溶液再经结晶透析、冻干,获得较高纯度的胰蛋白酶...