将凝固的胶板装入电泳槽内，并在电泳槽内加入SDS-PAGE电泳缓冲液，把胶浸泡一段时间，时间越长越好（防止梳子与胶相连，或胶因湿度不够而萎缩）；（6）点样时，再把梳子拔出来，拔时动作要轻，防止胶齿被拔断。二、SDS-PAGE电泳1、调胶：拔掉SDS胶上的梳子，并用小针调整齿的位置（使它们都平行）。2、点...
说一下我的步骤。1,分离胶12%,浓缩胶4%。胶的制备可以确定没问题。2,样品处理:提蛋白时用的是碱溶酸沉法,稻米已脱脂。称取自己提的稻米蛋白1mg以后用1mlPBS稀释。测样品蛋白浓度,显示所提蛋白杂质含量较高,大概在1.5mg/lml左右。短离心,煮沸10分钟,再10000转离心10min。上样量分别加了10ul,5ul。3,电泳...
一、准备材料 跑蛋白胶电泳分析需要的材料有:电泳槽、凝胶板、电极、试剂、样品等。在进行跑蛋白胶电泳前,需确认所有材料都已准备好,并检查是否完好无损。 二、安装电泳槽 1. 在安装电泳槽前,需先检查电泳槽是否清洁干净,无杂质。将电泳槽插头连接好,注意电极连接的极性。 2. 将电泳槽...
(5)用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。(小玻璃板面向内，大玻璃板面向外。若只跑一块胶，那槽另一边要垫一块塑料板且有字的一面面向外。) (6)测完蛋白含量后，计算含50 ng蛋白的溶液体积即为上样量。取出上样样品至0.5 ml离心管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。(上样总体积一般...
凝胶阻滞EMSA实验步骤 | 凝胶阻滞(Electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验是体外分析DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。其原理为蛋白质与核酸分子结合后将大大增加其相对分子质量,而凝胶电泳中核酸的迁移率与其相对分子质量成正比,因此没有结合蛋白质的核酸片段跑得快,而与蛋白质结合形成复合物的核...
酶切后取少量电泳检测已酶切完全(只有一条带),无需跑胶→切胶→溶胶,直接进行结合→洗涤→洗脱步骤,可有效减少损耗。建议酶切载体加入量1 μg以上。 10. 酵母单杂交的主要用途有哪些? 答:验证已知DNA与蛋白之间是否存在相互作用;分离结合于目的顺式调控元件或其它短DNA结合位点蛋白的新基因;定位已经证实的具有...
说一下我的步骤。1,分离胶12%,浓缩胶4%。胶的制备可以确定没问题。2,样品处理:提蛋白时用的是碱溶酸沉法,稻米已脱脂。称取自己提的稻米蛋白1mg以后用1mlPBS稀释。测样品蛋白浓度,显示所提蛋白杂质含量较高,大概在1.5mg/lml左右。短离心,煮沸10分钟,再10000转离心10min。上样量分别加了10ul,5ul。3,电泳...