原理:是通过电离源将蛋白质分子转化为离子,然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z)的蛋白质离子分离开来,经过离子检测器收集分离的离子,确定离子的M/Z值,分析鉴定未知蛋白。通常结合相应的处理及其他技术,能够比较准确、快速地鉴定蛋白质。 步骤:将感兴趣的蛋白点回收后,进行胰蛋白酶胶内酶解...
1. 蛋白质纯度分析以及分子量测定MALDI-TOF是一种软电离技术，可用于检测目标蛋白或多肽是否存在,有无二聚体存在,以及进行纯度情况的大体评估。MALDI-TOF鉴定分子量范围也非常广，能够鉴定700-60000Da的蛋白分子量，准确度高达0.1%~0.01%，远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术。2. 蛋白指纹谱鉴定（PMF...
质谱分析是一种利用质谱仪将待分析物质分解成离子,并通过质量-荷质比(m/z)进行分析鉴定的技术。其基本原理包括样品离子化、质谱仪分离、质谱检测和数据分析等步骤。 二、蛋白质质谱分析原理及流程 蛋白质质谱分析主要包括蛋白质样品的制备与纯化、蛋白质的酶解及肽段的提取与富集、质谱分析和数据解析等步骤。下面将...
质谱分析是先将物质进行离子化,按离子的质荷比分离,然后测量各种离子谱峰的强度而实现分析目的一种分析方法。质谱分析技术有着高灵敏度,高精准度等特点,能够准确快速地鉴定蛋白质。但质谱又是如何鉴定蛋白质的呢? 图1:蛋白质谱技术的概述 1、原理 目前对于蛋白质质谱检测方法主要有两种,一种是“自上而下”的分析...
质谱法分析蛋白的基本原理是通过电离源将蛋白质分子转化为离子,然后利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z)的蛋白质离子分离开来,经过离子检测器收集分离的离子,确定离子的M/Z值,分析鉴定未知蛋白。通常结合相应的处理及其他技术,能够比较准确、快速地...
当液滴越变越小时,液滴表面电场变得非常强大,最后变成完全脱溶剂的离子。这样样品离子就以单电荷或多电荷的形式进入气相,进行质谱分析。 图1 两种离子化方式示意图 在蛋白质祖学的研究中,蛋白质混合物经过胰蛋白酶酶切为短肽片段,经过色谱分离进入质谱仪中。质谱仪离子化源将样品离子化使肽段带电荷,通过记录离子...
蛋白质质谱鉴定的基本原理是用蛋白酶将蛋白质消化成肽段混合物,经MAILDI或ESI等软电离手段将肽段混合物离子化,然后通过质量分析器将具有特定质荷比的肽段离子分离开来。通过实际谱图和理论上蛋白质经过蛋白酶消化后产生的一级质谱峰图和二级质谱峰图的比对,进行蛋白质鉴定。
质谱蛋白鉴定的原理主要基于以下三点:质量分析、肽段指纹比对和数据库搜索。 1.质量分析 质谱仪通过测量离子的质量和电荷比,可以得到蛋白质的质量信息。这些质量信息能够反映出蛋白质的氨基酸组成和修饰等信息。 2.肽段指纹比对 通过酶切后的蛋白质产生的肽段和其质谱图,可以提供蛋白质的肽段指纹信息。通过比...