蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。 实验原理与材料 一、原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌 BL21 中,在 37℃,IPTG 诱导下,超量表达携带有 6 个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过...
携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 实验材料:大肠...
实验十 蛋白质的表达分离纯化和鉴定第一部分 蛋白质的表达分离纯化目的要求1了解重组蛋白表达的方法和意义。2了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。实验原理目的基因在宿主细胞中的高效表达及表达的重组蛋白的分离纯化对理论研究和实验应用都具有重要的意
实验目的 1.了解外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达情况 2.学会用SDS-PAGE电泳法分离不同分子量的蛋白质 3.学习通过亲和层析法纯化目的蛋白 4.学会考马斯亮蓝染色法和蛋白质杂交法检测蛋白质 实验原理 1.外源基因在大肠杆菌细胞中的诱导表达:将外源基因克隆在特殊的表达载体中,让其在E. coli中表达,该表达载体...
蛋白表达纯化是实验室中常用的一项技术,用于获取特定蛋白的纯净样品,需要仔细设计实验方案、选择适当的宿主细胞和表达系统,并采取合适的纯化策略,以最大程度地提高目标蛋白的纯度和活性。
一、重组蛋白质的诱导表达 1.挑取转化有质粒的单菌落,接种于 3ml 选择性 LB 液体培养基中,37 oC,250rpm/min 振摇培养过夜。 2. 次日将培养过夜的菌液 500 μl 再接种于 10 ml(1:::20)选择性 LB 液体培养基中,37 oC,250 rpm/min 振摇培养至光密度(OD600=0.6)时,取 1 ml 样本作为诱导前标本,10000...
1 实验方法原理携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中，在 37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸（NTA）使镍离子（Ni2+）固相化的层析介质加以提纯，实为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳...
蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。 1 实验步骤 一:材料准备 1. 实验材料:大肠杆菌 BL21、LB 液体培养基、氨苄青霉素、Washing Buffer、Elution Buffer、IPTG、蒸馏水、胰蛋白胨、酵母粉、氯化钠 ...
一、实验方法原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21中,在 37℃,IPTG诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和...
蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。 实验原理与材料 一、原理 携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌 BL21 中,在 37℃,IPTG 诱导下,超量表达携带有 6 个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过...