蛋白质含量(浓度)测定,是生化检测中的基本内容,常见的测定方法有:凯氏定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。考马斯亮蓝法(Bradford法)。 1)凯氏定氮灵敏度低,适用于0.2~1.0mg氮,误差为±2%费时8～10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮(可用三氯乙酸沉淀蛋白质而...
(2)测定中,蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上,测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。 (3)利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用,重复测定吸光度时,比色杯一定要冲洗干净,制作蛋白标准曲线的时候,蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定,防止...
根据所测样品的吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。注意,由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸,显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度(相对于标准蛋白质)。 五、注意事项 (...
Lowry蛋白测定法：这是一种过去常用的蛋白质浓度测定方法。它利用酚酞试剂与蛋白质中的肽键反应生成蓝色复合物进行测定。该方法可检测的最低蛋白质量达5mg，通常的测定范围是20~250mg。实验步骤包括：将酚酞试剂加入待测蛋白样品中，加入铜试剂作为催化剂，然后在650-750nm处测量吸光度，并根据标准曲线计算蛋白质浓度。
紫外吸收法是通过测定蛋白质在特定波长下的吸光度来计算蛋白质浓度。蛋白质在280 nm波长下的吸光度与其含量成正比。该方法对纯度较高的蛋白质测定较为准确,但对于包含核酸、色素等物质的溶液会有干扰。 4.氨基酸分析法 氨基酸分析法是通过测定蛋白质中的氨基酸含量来估计蛋白质浓度。可使用色谱法或光谱法进行氨基酸测...
步骤：准备毛细管电泳仪和样品。进行电泳并记录图谱。分析图谱，根据迁移时间和峰面积计算蛋白质浓度。免疫测定法（如ELISA）原理 通过特异性抗体与目标蛋白质的结合来定量测定特定蛋白质。设计多样，包括间接法、双抗体夹心法和抗原竞争法等。步骤：加样：将稀释后的待测样品加入已包被抗体的反应孔中，孵育后洗涤。加...
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用...
🔬蛋白质浓度测定在科研中至关重要,以下是三种常用的方法:1️⃣ 紫外吸收法(UV法) 原理:在280nm波长下,蛋白质的吸收值与浓度成正比。 简易经验公式:蛋白质浓度(mg/ml) = [1.45*OD280-0.74*OD260]*Dilution factor 精确计算:通过计算OD280/OD260的比值,查表得到校正因子F,再计算最终结果:蛋白质浓度(mg...
(1)紫外吸收法:利用蛋白某些集团具备紫外吸收的性质,虽然精确度不高,但是操作简便,样品可以回收同时可以估算蛋白含量。(2)双缩脲在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物,之一反应称为双缩脲反应。因为蛋白质中有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲反应,且颜色深浅与蛋白质的含量的关系在一定范围内符合比尔定律,而...