优化表达条件:比如调整温度、培养基成分和诱导时间等,这些都能影响蛋白的表达量。合理优化这些条件,说不定就能看到明显的提升。 更换表达载体和菌株:有时候,换个表达载体或者菌株,就像给蛋白换了个更舒适的“家”,表达量自然就上去了。 使用亲和层析等方法:如果蛋白表达量还是上不去,可以试试亲和层析等纯化方法,这些...
你这种情况,可能更换载体,未必作用很大,不过你可以试试。 不过我建议, 表达毒性蛋白的时候,你要高od,诱导,短时间收菌。 例如,在od=1.0的时候诱导,然后1.5小时,或者更短收菌。 此外还可以考虑浓缩法培养,就是准备2.5的LB,其中两个先摇到1.0,然后离心浓缩,再用剩下的0.5L,把菌体悬浮,继续培养0.5h,然后诱导,...
嗯，甘油可以增强稳定性，还有，你确定原核表达是最佳的解决方案么？个人觉得真核会更好些。
目前是有两个克隆有蛋白表达，但是表达量很低。我试着改变了IPTG的浓度，在0.1-1之间变动；诱导温度...
2.我们实验室使用的是Invitrogen公司原装的HEK293FT细胞，293FT细胞转染效率和表达量都有非常好。
1. 转染效率低,复孔重复性差问题:转染效率低,复孔重复不出来怎么办?解答:首先要确保细胞状态良好,选择处于分裂期的细胞进行转染。阳性对照可以选择过表达的荧光蛋白质粒。DNA质量尤为重要,建议先进行酶切验证。实验结果很灵敏,有一定差异是正常的,通常只要确保在一个数量级之内即可。如果差异超出这个范围,可以从以下...
你可以排查下问题，看看是不是试剂盒问题，293T细胞一般还是很好转的，RFect的毒性较低，我之前用着挺好...
第一次在37℃表达，用0.1~1mMIPTG诱导结果还不错，蛋白基本都在上清中，但表达量也不是很高（见附件...
之前用100mL BMMY诱导产蛋白，纯化后收集3mL，20μL上样，有条带，但是特别浅，对照无条带。问：...