蛋白质片段互补测定 (PCA) 是一种尖端技术,它通过从多个非功能性蛋白质片段中重组功能性蛋白质来操作。这种创新方法涉及将靶蛋白与报告蛋白的互补片段(如荧光素酶或绿色荧光蛋白 (GFP))融合,以阐明和突出它们之间的相互作用。在靶蛋白相互作用时,报告蛋白的片段在附近结合,从而重建功能性蛋白,并最终产生可
蛋白片段互补方法及其在药物筛选中的应用 本文简述了蛋白片段互补及功能互补(proteinfragmentcomplementation assay:PCA)。将报告蛋白分割成两个没有功能的片段,分别与两个待检测的蛋 白质融合,如果待检测的两个蛋白质能够发生相互作用,就可以使报告蛋白的两 个片段发生互补,从而使其功能得以重建。该技术对药物发现及筛选...
1.1蛋白片段互补分析的原理许多蛋白如果分割成2个片段后,单个片段都没有活性,蛋白质的功能丧失,但当这2个片段充分靠近时,蛋白质功能可以恢复。PCA就是利用蛋白质的这一特性将一个功能蛋白或报告蛋白(通常是酶)的基因合理地分割成N端和C端2个片段,分别与目标蛋白连接构建成融合蛋白。如果2个目标蛋白相互作用,则报告...
图1荧光蛋白片段互补原理示意 Fig.1Complementarityprincipleoffluorescentproteinfragments 表1几种报告蛋白及其检测方法和应用Table1Severalkindsofreporterproteinsandtheirdetectionmethodsandapplications 靠近和重新折叠,功能得到恢复[1-2]。图1以荧光蛋白为例示意了这一原理。
摘要: 蛋白片段互补分析技术是近年发展起来的一种分析蛋白质- 蛋白质相互作用的新方法。典型的蛋白片段互补分析技术已经成功地利用二氢叶酸还原酶,β- 内酰胺酶,绿色荧光蛋白以及荧光素酶片段互补进行胞内蛋白分子相互作用研究。这一技术不仅可以动态、定位分析细胞内蛋白质分子相互作用、绘制细胞内信号传导、蛋白质生物...
蛋白质相互作用检测新方法——蛋白片段互补 维普资讯 http://www.cqvip.com
为了克服上述缺点,最近出现了以测定荧光蛋白(fluorescent proteins,FPs)或生物发光蛋白(Bioluminescent proteins,LPs)的共振能量转移(resonance energy transfer,RET)为基础的新技术和蛋白质片段互补技术(protein-fragment complementation assays,PCAs)[2-3] ,揭示了活细胞内 PPIs 的实时特征并实现了可视化。RET 是距离很近...
蛋白片段互补方法及其在药物筛选中的应用
本发明采用人源化的gaussia荧光素酶(humanizedgaussialuciferase,hgluc)作为报告基因,基于蛋白质片段互补技术将hgluc分割成两个可互补的片段hglucn和hglucc,将两片段分别连接gsdme,形成融合蛋白。用于蛋白质片段互补技术的荧光素酶(luciferase)还包括有萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase,fluc)、renillaluciferase(rluc)、gauss...
萤火虫荧光素酶片段互补图像技术(LCI)是近年来形成的研究蛋白互作的新技术,把2个目标蛋白分别连接于萤火虫荧光素酶的C端和N端。如果2个蛋白互作,N段和C端接近形成有活性的荧光素酶。基于烟草瞬时表达的LCI技术将LCI技术与烟草瞬时表达相结合,在研究植物蛋白的相互作用中,可以实现活体细胞内实时、定量分析;不受植物自...