蛋白质印迹法（Western Blotting）的6个基础步骤：1.样品制备2.通过凝胶电泳分离蛋白质 3.蛋白质转移（电印迹）到膜上 4.膜封闭 5.免疫检测6.靶蛋白显印 WB法可用于检测天然和合成来源的蛋白质。来自表达系统的重组蛋白和来自生物样品的内源蛋白都可以用蛋白质印迹法检测。对于要通过WB分析的蛋白质，首先必须要...
二、半干法转膜：提前准备：切取SDS-PAGE凝胶目的条带区域（也可以将整个分离胶进行转膜，转膜后再切取PVDF膜上目的条带区域），按凝胶大小剪切滤纸和PVDF膜（可适当比凝胶大一圈）。将滤纸和凝胶浸泡到转膜液中，同时活化PVDF膜，将PVDF膜在无水甲醇中浸泡30 s来活化膜上带正电的基团，提高膜与蛋白样品（带负电...
蛋白印迹:蛋白印迹,也称为免疫印迹,是一种分析和鉴定特定蛋白质的技术,用来检测在不均一的蛋白质样品中是否存在目标蛋白的一种方法。即将混杂的总蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后,转移至固相膜(如硝酸纤维素膜、尼龙膜和PVDF膜等)上,再用特定蛋白质抗体进行免疫反应,显色后,可显示出该特定蛋...
Western Blot(WB)是在分子生物学、生物化学和免疫遗传学领域中一种常用的实验方法,并且是一种能对蛋白表达进行定性和半定量的分析方法。它是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的来源于细胞或生物组织样品的蛋白质进行着色,并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
蛋白质免疫印迹法，被誉为生物学领域的“黄金标准”，简称为WB，是一种精确而灵敏的技术，用于深入研究生物样本中特定蛋白质的表达情况。通过一系列精心设计的步骤，包括SDS-PAGE电泳、转印、一抗孵育、二抗孵育以及化学发光，WB能够精确捕捉到样本中目标蛋白质的存在与否，以及其在不同条件下的表达水平。在蛋白质研究...
(6)转完后将膜用1×丽春红染液染5 min(于脱色摇床上摇)。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白。 将膜晾干备用。 5. 免疫反应 (1)将膜用TBS从下向上浸湿后,移至含有封闭液的平皿中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h。 (2)将一抗用TBST稀释至适当浓度(在1.5 ml 离心管中);撕下适当大小的一块儿...
与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。 经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽...
蛋白质印迹法（免疫印迹试验）即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所（...
WesternBlot蛋白免疫印迹法3Western blot 3.1 1)30%聚丙烯酰胺储备液(Acr/Bis): 丙烯酰胺(Acr),29g;N,N-亚甲基双丙烯酰胺(Bis),1g,去离子水溶解,37℃ 水浴助溶,定容至100mL。0.45mm滤器过滤,棕色瓶4℃避光保存。 2)10%十二烷基硫酸钠(5口5): SDS,10g;H2O,80mL。68℃加热溶解,浓HCl调pH至7.2,定容至...