1、磷酸化:修饰特点：磷酸化是蛋白质上特定氨基酸残基（如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸）被磷酸团修饰的过程。检测方法：Western blot 使用抗磷酸化的特异性抗体；质谱分析；磷酸化酶底物阵列。图1. 酸化定量蛋白组学分析流程 2、乙酰化:修饰特点：赖氨酸残基的氨基被醋酸酰基修饰。检测方法：Western blot 使用抗乙酰赖氨酸...
1.Western Blot：利用特异性抗磷酸化位点的抗体来检测磷酸化蛋白。这种方法可以为特定的磷酸化位点提供半定量数据。1. 优点：相对简单、灵敏；可以定性和定量分析。2. 缺点：需要高特异性的抗体；不能确定精确的磷酸化位点。2.免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP)：首先利用特异性抗体将目标蛋白从细胞裂解液中沉淀下来...
当所研究的蛋白修饰或修饰位点是已知的或被报道过,并且已经有了位点特异性商品化抗体,只要在一定的刺激条件下或建立某一种疾病动物模型,收集足量的细胞或组织进行裂解,获取蛋白提取物,再利用修饰位点特异性抗体进行WB分析即可。由于很多常见的磷酸化位点特异性抗体开发的相对比较多,所以这种方法最适合磷酸化的检测。当然...
是当前最强大的用于检测和定量蛋白翻译后修饰的工具。它可以准确地鉴定蛋白的修饰位点和修饰类型。4.放射性标记:例如，在磷酸化研究中，可以使用放射性的γ-32P ATP来标记磷酸化的蛋白质。5.酶联免疫吸附试验 (ELISA):使用特异性抗体来检测和定量特定的蛋白修饰。6.荧光共振能量转移 (FRET):用于在活细胞中实时监测...
甲基化特异性酶切可以通过使用具有甲基化识别能力的酶来切割甲基化的蛋白质，从而确定甲基化修饰的位置和程度。1.质谱分析：质谱分析是一种常用的蛋白甲基化修饰检测方法。该方法利用质谱仪对蛋白质样品进行离子化和分析，以确定甲基化修饰的存在和程度。主要有两种质谱方法用于蛋白甲基化修饰检测：质谱图谱和定量质谱。...
翻译后修饰之于蛋白质,就像七十二变之于孙悟空,蛋白的翻译后修饰发挥着极其重要的生物功能和作用,具备着生命研究和探索的巨大潜力。无论是在医学领域还是农林领域,文章发表还是基金申请,近年来关于翻译后修饰的研究都呈现出井喷之势。 质谱技术是翻译后修饰研究的最重要工具,而中科新生命作为质谱应用领域的领航者,十...
组蛋白是核心的组成染色质的蛋白质，它们通过翻译后修饰在基因表达调控中发挥重要作用。常见的组蛋白修饰包括：1. 乙酰化: 主要发生在赖氨酸残基上，与基因的激活密切相关。2. 甲基化: 通常发生在赖氨酸和精氨酸残基上，可以导致基因沉默或激活，取决于甲基化的位点和程度。3. 磷酸化: 通常与染色质重塑和DNA修复...
准确检测蛋白质的修饰状态是蛋白组修饰研究的关键环节。以下是几种常用的关键方法：2.1 质谱技术 质谱技术是准确检测蛋白质修饰状态的重要方法之一。通过质谱技术可以确定修饰的类型、位置以及修饰的丰度。质谱技术的发展使得蛋白质修饰的分析更加高效和精确。2.2 免疫沉淀 免疫沉淀是一种常用的靶向分析方法，通过特异性...
图1.免疫沉淀PTM修饰蛋白的一般工作流程。 利用优化的IP系统对检测目标POI的低丰度PTMs至关重要。蛋白抗体特异性IP: Western Blot分析 蛋白质特异性IP利用针对POI的抗体来免疫沉淀该蛋白质的所有物种。然后通过SDS-PAGE分离富集的蛋白质，转移到PVDF膜上，并通过免疫印迹分析，方法是用靶PTM抗体探测。图2提供了利用...